嗜鹽α-淀粉酶的克隆表達(dá)及嗜鹽機(jī)制的探究.pdf

1、分類號(hào)UOC碩士學(xué)位論文密級(jí)壘主編號(hào)嗜鹽僅淀粉酶的克隆表達(dá)及嗜鹽機(jī)制的探究李雪學(xué)位授予日期2幽一626嗜鹽0【淀粉酶的克隆表達(dá)及嗜鹽機(jī)制的探究摘要隨著現(xiàn)代工業(yè)生產(chǎn)快速發(fā)展，許多生產(chǎn)過程需要在特定環(huán)境下迸行，如高溫、高鹽或堿性環(huán)境，這就導(dǎo)致了極端環(huán)境工業(yè)用酶的開發(fā)和利用。嗜鹽性僅淀粉酶因其能夠在高鹽環(huán)境中具有穩(wěn)定的酶活進(jìn)而能抵抗工業(yè)生產(chǎn)中極端環(huán)境，這一特性越來越引起研究人員的關(guān)注。從弗氏檸檬酸桿菌(Citrobacterfreundii)

2、基因組DNA中克隆到一個(gè)淀粉酶基因尼，并在大腸桿菌JMl09中進(jìn)行過量表達(dá)。對(duì)重組蛋白(F2)進(jìn)行純化和酶學(xué)特性測(cè)定表明其在有NaCl存在的條件下才具有酶活性，而在沒有NaCl的條件下酶活基本喪失，因此鑒定F2為嗜鹽性O(shè)【淀粉酶。以可溶性淀粉為底物時(shí)，F(xiàn)2的最適溫度為50。C，最適pH為65，最適NaCl濃度為3mol／L，并且在NaCl濃度為6mol／L時(shí)還有大約50％的相對(duì)酶活力存在。K6為本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的來源大腸桿菌JMl09的重組