EGF及CTGF在合并腦外傷骨折骨愈合過(guò)程中的表達(dá).pdf

1、在腦外傷合并骨折患者的治療過(guò)程中,發(fā)現(xiàn)合并腦外傷的患者骨折愈合速度較單純骨折明顯加快。這一現(xiàn)象引起骨科學(xué)界的廣泛關(guān)注,并對(duì)其進(jìn)行了較為深入的研究。目前受關(guān)注較多的有骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF)、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF)、血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)和胰島素樣生長(zhǎng)因子(IGF)等血清因子。骨科學(xué)家逐步開(kāi)展以上這些生物因子在臨床應(yīng)用方面的研究,取得了一定的臨床結(jié)果,但是骨折愈合是多種因子參與的復(fù)雜過(guò)程,有哪些因子參

2、與,各自作用如何,仍未能確定。以往實(shí)驗(yàn)表明合并腦外傷合并骨折患者血清中表皮生長(zhǎng)因子(EGF)的濃度明顯高于單純骨折組,但尚缺乏對(duì)骨折部位EGF的表達(dá)水平的研究。結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)是一種具有多種生物學(xué)活性,可以參與多種生理學(xué)過(guò)程的生長(zhǎng)因子,對(duì)成纖維細(xì)胞具有趨化及促有絲分裂作用,CTGF還具有促細(xì)胞增殖、遷移及分化等作用,參與骨骼形成/再生、創(chuàng)傷愈合。但在合并腦外傷的骨折愈合過(guò)程中,CTGF如何表達(dá)和發(fā)揮作用,尚未查找到相關(guān)研究。

3、
　　 目的:通過(guò)測(cè)定比較合并腦外傷骨折患者與單純骨折患者骨痂組織中EGF、CTGF的表達(dá)水平,用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析是否存在差異,確定合并腦外傷骨折患者骨折愈合加速是否與EGF、CTGF高表達(dá)存在關(guān)系,為骨折臨床治療提供依據(jù)。
　　 方法:
　　 1.納入標(biāo)準(zhǔn):(1)性別不限,年齡在18～50歲之間,GCS評(píng)分在13-14分之間,無(wú)其它神經(jīng)系統(tǒng)及心、肝、腎疾患,無(wú)血液病,無(wú)糖尿病及成骨不全。(2)骨折部位:均為閉合性

4、股骨骨折。(3)診斷標(biāo)準(zhǔn):X光片確定骨折部位及類(lèi)型;CT檢查證實(shí)腦外傷。(4)治療方法:骨折部位局部外固定。
　　 2.樣本采集:患者傷后骨折部位石膏外固定,在患者腦外傷情況得到基本穩(wěn)定,無(wú)生命危險(xiǎn),具備骨折手術(shù)條件時(shí),術(shù)中取患者骨折處多余骨痂(取標(biāo)本時(shí)是患者受傷2到4周之間),單純骨折組(對(duì)照組)骨痂來(lái)源于外固定效果不滿(mǎn)意,延期手術(shù)患者。均取得患者家屬同意。所取標(biāo)本立即置入4％多聚甲醛保存,并標(biāo)號(hào)。
　　 3.含量測(cè)定

5、:所留取的標(biāo)本經(jīng)過(guò)一系列處理,采用免疫組織化學(xué)技術(shù)(Immunohistochemistry;IHC)和原位雜交組織化學(xué)技術(shù)(In SituHybridization Histochemistry,ISHH)進(jìn)行組織學(xué)觀察,檢測(cè)骨痂組織中EGF、CTGF的表達(dá)。
　　 4.圖像分析:選擇實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的陽(yáng)性和陰性組織相,100×或400×顯微照相,進(jìn)行圖象分析,讀取陽(yáng)性細(xì)胞數(shù),結(jié)果按陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)和陽(yáng)性細(xì)胞顯色強(qiáng)度進(jìn)行分級(jí)得出數(shù)據(jù),

6、最后將所得數(shù)據(jù)采用SPSS17.0版統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
　　 結(jié)果:
　　 1.免疫組織化學(xué)染色
　　 1.1.單純骨折組,骨痂內(nèi)可見(jiàn)EGF及CTGF表達(dá)于肉芽組織、增生的結(jié)締組織區(qū)域及軟骨細(xì)胞團(tuán)周?chē)鷧^(qū)域,EGF及CTGF在成纖維細(xì)胞、成骨細(xì)胞及破骨細(xì)胞有少許表達(dá),在部分增生的纖維組織、毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞中有表達(dá);在新生的軟骨細(xì)胞團(tuán)區(qū)表達(dá)不明顯。
　　 1.2.合并腦外傷骨折組骨痂內(nèi),可見(jiàn)EGF及CT

7、GF在肉芽組織、增生的結(jié)締組織區(qū)域、新生的骨小梁周?chē)鷧^(qū)域及軟骨組織周?chē)鷧^(qū)域大部強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá);在骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞和纖維母細(xì)胞、毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞和新形成的骨基質(zhì)均呈陽(yáng)性染色,大部分軟骨細(xì)胞也呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。
　　 2.原位雜交組織化學(xué)技術(shù)
　　 2.1.單純骨折的骨痂內(nèi)可見(jiàn)EGF及CTGF弱表達(dá)于肉芽組織、增生的結(jié)締組織區(qū)域及軟骨細(xì)胞團(tuán)周?chē)鷧^(qū)域;在新生的軟骨細(xì)胞團(tuán)區(qū)表達(dá)不明顯。
　　 2.2.合并腦外傷骨折的骨痂內(nèi)可見(jiàn)

8、EGF及CTGF在肉芽組織、增生的結(jié)締組織區(qū)域、新生的骨小梁周?chē)鷧^(qū)域及軟骨組織周?chē)鷧^(qū)域強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),在骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞和纖維母細(xì)胞、毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞和新形成的骨基質(zhì)均呈陽(yáng)性染色,部分軟骨細(xì)胞強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。
　　 3.統(tǒng)計(jì)分析
　　 3.1.單純骨折組和合并腦外傷骨折組取痂時(shí)間沒(méi)有差異(p＞0.05)。
　　 3.2.單純骨折組和合并腦外傷骨折組之間EGF免疫組化評(píng)分陽(yáng)性率比較,合并腦外傷骨折組骨痂中EGF免疫組化評(píng)

9、分陽(yáng)性率明顯較單純骨折組高(p＜0.05)。
　　 3.3.合并腦外傷骨折組骨痂內(nèi)CTGF免疫組化評(píng)分陽(yáng)性率比單純骨折組骨痂內(nèi)CTGF免疫組化評(píng)分陽(yáng)性率高(p＜0.05);
　　 3.4.單純骨折組和合并腦外傷骨折組之間EGF原位雜交評(píng)分陽(yáng)性率比較,合并腦外傷骨折組骨痂中EGF原位雜交評(píng)分陽(yáng)性率明顯較單純骨折組高(p＜0.05)。
　　 3.5.骨痂中EGF的表達(dá)水平與患者的年齡不相關(guān)(r=0.194,p＞0.0