攜帶blaCTX-M-15流行質(zhì)粒的研究.pdf

1、目的：研究廣州地區(qū)攜帶blaCTX-M-15質(zhì)粒的分子生物學(xué)特征。
　　 方法：以2007年到2008年期間來源于廣州9家醫(yī)院的產(chǎn)ESBL的181株和180株肺炎克雷伯菌為研究對象,PCR方法篩查攜blaCTX-M-15菌株、確定大腸埃希菌的系統(tǒng)發(fā)育群和分析流行質(zhì)粒的耐藥基因構(gòu)成,PFGE和MLST了解blaCTX-M-15陽性株的同源性,MIC檢測菌株對常用抗生素的敏感性。血清凝集試驗(yàn)確定血清型。接合實(shí)驗(yàn)了解攜帶blaCTX-

2、M-15質(zhì)粒的可接合性,限制性內(nèi)切酶分析質(zhì)粒的同源性。二代測序技術(shù)對質(zhì)粒的全序列進(jìn)行測序。
　　 結(jié)果：檢出blaCTX-M陽性菌株243株,其中CTX-M-14和CTX-M-15分別為115和84株。37株大腸埃希菌和47株肺炎克雷伯菌攜帶blaCTX-M-15。blaCTX-M-15陽性的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌分別用PFGE確定為28個(gè)和30個(gè)基因型。攜blaCTX-M-15大腸埃希菌的系統(tǒng)發(fā)育群以D群(67.8％)和A群

3、(21。4%)為主。大腸埃希菌的血清型呈散在分布,未發(fā)現(xiàn)O25:H4血清型。大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌的ST型無明顯集中趨勢。58個(gè)基因型的代表菌株中有40株可將攜blaCTX-M-15的質(zhì)粒傳遞給受體菌E.coli C600(Rif),其中大腸埃希菌有19株、肺炎克雷伯菌有2l株。35.7%(10/28)的大腸埃希菌中攜帶blaCTX-M-15的質(zhì)粒大小為65KB,40.0%(12/30)的肺炎克雷伯菌中攜帶blaCTX-M-15的質(zhì)粒

4、大小為92KB。通過限制性內(nèi)切酶分析,發(fā)現(xiàn)存在2種流行質(zhì)粒,命名為p15-e和p15-k。通過PCR調(diào)查,p15-e上存在blaCTX-M-15和ISEcpI;p15-k上存在blaCTX-M-15,blaTEM-1。分析p15-k全序列發(fā)現(xiàn)同浙江發(fā)現(xiàn)的質(zhì)粒pKF3-94具有明顯的同源性。
　　 結(jié)論：廣州地區(qū)CTX-M型ESBL主要以CTX-M-14為主;CTX-M-15位居第二位,但上升趨勢非常明顯。廣州地區(qū)攜帶blaCTX

5、-M-15的菌株主要以獨(dú)立基因型為主,沒有細(xì)菌克隆株大規(guī)模傳播的證據(jù)。攜帶blaCTX-M-15的大腸埃希菌的種系發(fā)育群主要以D群和A群為主,同國外比較存在地域差異。廣州地區(qū)攜帶blaCTX-M-15的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌的ST型和血清型均與國外報(bào)道存在差異。blaCTX-M-15存在于可接合性質(zhì)粒上。大腸埃希菌中主要集中在大小約65Kb的質(zhì)粒;肺炎克雷伯菌主要集中在92Kb質(zhì)粒。廣州地區(qū)大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌中分別存在一個(gè)65K