攜帶IBV基因真核表達(dá)質(zhì)粒的大腸桿菌工程菌發(fā)酵工藝研究.pdf

1、本研究以本課題組構(gòu)建的攜帶雞傳染性支氣管炎病毒S1、M、N基因真核表達(dá)質(zhì)粒(pVAX1-S1、pVAX1-M、pVAX1-N、VR1020-S1、VR1020-M、VR1020-N)的大腸桿菌基因工程菌為研究對(duì)象，對(duì)其發(fā)酵工藝進(jìn)行了研究。 采用單因子分析和正交設(shè)計(jì)，搖瓶發(fā)酵對(duì)各重組大腸桿菌的培養(yǎng)基條件進(jìn)行了研究，確定優(yōu)化了培養(yǎng)基的成份。發(fā)酵后，以優(yōu)化的堿裂解法提取質(zhì)粒，產(chǎn)量最高可達(dá)27.8mg/L，純度達(dá)到1.88，是未優(yōu)化前質(zhì)

2、粒產(chǎn)量的2.62倍。 研究了攜帶雞傳染性支氣管炎病毒真核表達(dá)質(zhì)粒基因工程菌在5L發(fā)酵罐中的發(fā)酵工藝。優(yōu)化了上罐發(fā)酵接種量、培養(yǎng)溫度、初始pH及溶氧等培養(yǎng)條件。確定了優(yōu)勢(shì)菌株pVAX1-M，以優(yōu)化的堿裂解法提取質(zhì)粒產(chǎn)量可達(dá)57mg/L，純度達(dá)到1.88，是未優(yōu)化前質(zhì)粒產(chǎn)量的4.3倍。 對(duì)發(fā)酵液用熱激法和堿裂解法兩種不同的提取方法進(jìn)行粗提，對(duì)堿裂解法進(jìn)行優(yōu)化，對(duì)裂解時(shí)間和裂解反應(yīng)液的比例進(jìn)行研究。再用聚乙二醇和硅藻土兩種方法