低分子量肝素鈉口服給藥系統(tǒng)的研究——納米乳及腸粘附貼的研制.pdf

1、大分子藥物由于口服吸收具多重屏障，絕大多數(shù)只能以注射途徑給藥，故患者順應(yīng)性差。本文選擇預(yù)防和治療血栓栓塞性疾病的低分子量肝素鈉(LMWH)作為模型藥物，探討改善大分子藥物口服生物利用度的方法。在總結(jié)肝素和LMWH口服吸收已有研究基礎(chǔ)上，結(jié)合LMWH口服吸收促進(jìn)劑的篩選，本文研制了LMWH兩種新型口服給藥系統(tǒng)一納米乳和腸粘附貼。首次以促吸收為出發(fā)點，結(jié)合相圖研究，著重從消化角度確立了可完全消化的LMWH口服納米乳處方，在體和體內(nèi)試驗取得了

2、良好的效果。首次應(yīng)用小片工藝制備了LMWH腸粘附貼，體外試驗初步表明具有良好的促LMWH腸吸收作用。本研究為開發(fā)LMWH口服制劑奠定基礎(chǔ)并拓展了納米乳和腸粘附貼在大分子藥物口服給藥上的應(yīng)用。 首先建立了利用天青A染料以可見分光光度法測定腸滲透液中LMWH濃度的方法。以外翻腸囊法研究LMWH經(jīng)大鼠各腸段的滲透順序為十二指腸≥空腸>回腸>結(jié)腸；LMWH腸滲透機制為被動擴散；各吸收促進(jìn)劑增加LMWH空腸滲透的強弱順序為：33mMSNA

3、C>0．5％Imwitor742~10mMNaGC>13mMNaCap>15mMNaTC>15mMNaOA>1％Tween80。 以W／O型納米乳載水量10％以上為目標(biāo)，通過相圖研究表明中鏈三甘酯Miglycol812N較長鏈甘油酯更容易形成W／O型納米乳；在Miglycol812N／Surfactant／Imwitor742，Km為1條件下，表面活性劑Tween80、CremophorEL和TPGS均能在Miglycol812

4、N含量50％或60％時形成載水量符合要求的納米乳；在Miglycol812N／Tween80／Cosuffactant，Km為1條件下，助表面活性劑PEG400、丙二醇和Imwitor742均能在Miglycol812N含量50％或60％時形成載水量符合要求的納米乳；在Miglycol812N／Tween80／Imwitor742條件下，Km為1或0．5均能在Miglycol812N含量50％或60％時形成載水量符合要求的納米乳。以上結(jié)

5、果表明，僅以相圖上W／O型納米乳載水量大小(或納米乳區(qū)面積大小)為依據(jù)難以對納米乳處方進(jìn)行有效篩選，故有必要從促吸收角度對納米乳處方作進(jìn)一步篩選，即利用納米乳油相一中鏈三甘酯的消化產(chǎn)物有利LMWH腸吸收而確定從消化速度和消化程度進(jìn)一步研究納米乳處方。 以堿滴定中和中鏈三甘酯酯解所釋放的脂肪酸來表征其消化速度和程度。通過考察膽鹽膠束種類、緩沖溶液pH條件、胰脂酶濃度以及Ca2+濃度對Miglycol812N在30min內(nèi)酯解速度和

6、程度的影響來選擇體外消化條件，確立體外消化模型為：50mMTrizmamaleate、150mMNaCl和5mMCa2+構(gòu)成緩沖系統(tǒng)并調(diào)節(jié)pH為7．5；5mMNaTDC和1．25mMPC組成膽鹽膠束；胰脂酶濃度為200U／mi。上述條件構(gòu)成的體外消化體系較為溫和，有助于鑒別影響納米乳消化的處方因素。 以體外消化模型對影響納米乳消化的各處方因素進(jìn)行詳盡考察。結(jié)果表明，中鏈甘油酯酯解于單位時間釋放的脂肪酸摩爾量是長鏈甘油酯的5-7倍

7、。表面活性劑均不同程度抑制中鏈三甘酯的酯解，其強弱順序為CremophorEL>TPGS>Tween80>Labrasol：隨著Tween80與Miglycol812N比例增加，Miglycol812N酯解受抑制程度也增強。助表面活性劑對Miglycol812N酯解的影響各有不同，乙醇和PEG400降低其酯解速度和程度，TranscutlP和Imwitor742加快、丙二醇減慢其酯解速度。只有Imwitor742對Tween80／Mig

8、lycol812N(1／1)的消化有恢復(fù)作用，Imwitor742／Tween80比例越高，體系消化也越快，當(dāng)Imwitor742／Tween80比例為1時，體系消化速度甚至超過Miglycol812N自然酯解速度。固定Imwitor742／Tween80(1／1)條件下，變動Miglycol812N比例不影響消化速度，但Miglycol812N含量較低時消化程度會有所降低。 通過上述影響納米乳消化的處方因素考察結(jié)果，對以Twe

9、en80為表面活性劑的各相圖進(jìn)行消化速度和程度的推斷，只有在Miglycol812N／Tween80／Imwitor742，Km為1或0．5的相圖中，對于載水量10％以上的納米乳處方，其消化速度均可超過Miglycol812N自身酯解速度，處方中中鏈三甘酯含量越高，消化程度也越完全，釋放辛／癸酸和辛／癸酸單甘酯等促吸收成分的量也越多，則促進(jìn)大分子藥物腸吸收的程度就越高。本研究首次以促吸收為出發(fā)點，結(jié)合相圖著重從消化角度指導(dǎo)W／O型納米乳

10、的處方篩選，可為大分子藥物口服設(shè)計出可完全消化或不可消化的納米乳處方。 依據(jù)上文研究結(jié)果設(shè)計LMWH口服可消化納米乳(NE-D)和不可消化納米乳(NE-ND)。體外消化試驗證實NE-D30min酯解率為后者7倍之多。兩種納米乳粒徑為25-30nm，在膽鹽膠束溶液稀釋下均轉(zhuǎn)相形成粒徑在200nm左右的O／W型普通乳劑；NE-D納米乳消化后所形成混合膠束粒徑為15．1nm。兩種LMWH納米乳溶出3min即可釋放90％的LMWH。

11、 翻轉(zhuǎn)腸囊實驗顯示NE-D納米乳的完全消化產(chǎn)物一混合膠束在各稀釋倍數(shù)對LMWH腸滲透的促進(jìn)作用均顯著大于NE-ND納米乳不可消化的乳滴。兩者消化產(chǎn)物促吸收程度均隨稀釋倍數(shù)增加而減少。分別以LMWH50mg／kg的劑量對大鼠空腸給予LMWH溶液劑、含載體SNAC35mg的LMWH溶液劑、LMWH納米乳NE-D和NE-ND后，絕對藥理利用度分別為1．02％、13．24％、15．24％和4．91％；APTT最大值分別為27s、108．2s

12、、96．2s和48．4s。上述制劑以相同劑量經(jīng)大鼠灌胃后，絕對藥理利用度分別為0．74％、4．40％、8．89％和2．01％：APTr最大值分別為25．3s、55．2s、74s和35．8s。LMWH各制劑空腸給藥和灌胃給藥的藥理利用度大小均為可消化納米乳>載體SNAC>不可消化納米乳>溶液劑。LMWH各制劑灌胃給藥的藥理利用度及APTT最大值均小于空腸直接給藥，表明胃腸稀釋效應(yīng)會影響LMWH各制劑的口服效果?？诜d體SNAC受胃腸環(huán)境影

13、響較大。LMWH可消化納米乳藥理利用度為不可消化納米乳的3倍以上，表明納米乳的消化對于LMWH的口服吸收具有重要的促進(jìn)作用。推測納米乳NE-D消化產(chǎn)物一辛／癸酸鈉、辛／癸酸單甘酯與膽鹽膠束以及表面活性劑Tween80共同構(gòu)成復(fù)雜的混合膠束起主要的促吸收作用。以上結(jié)果表明，LMWH口服可消化納米乳是具潛在臨床應(yīng)用價值的LMWH口服給藥系統(tǒng)。 通過Caco-2細(xì)胞實驗證實癸酸鈉／癸酸單甘酯膠束在一定程度上可打開細(xì)胞間緊密連接并增加F

14、D4的細(xì)胞轉(zhuǎn)運；膽鹽膠束本身不影響透膜電阻(TEER)及FD4細(xì)胞轉(zhuǎn)運，但可協(xié)同癸酸鈉／癸酸單甘酯膠束進(jìn)一步打開緊密連接并使FD4的細(xì)胞轉(zhuǎn)運進(jìn)一步提高；Tween80對上述作用沒有影響。還無法證實上述膠束對細(xì)胞膜的作用程度以及該膠束作用下跨細(xì)胞膜途徑對大分子水溶性物質(zhì)吸收的貢獻(xiàn)程度，有待于用膜片鉗技術(shù)進(jìn)行深入探討。 LMWH口服腸粘附貼是以粘附材料為小片骨架，結(jié)合腸貼原理設(shè)計而成的由片芯、阻水層和腸溶層構(gòu)成的小腸生物粘附系統(tǒng)。首

15、先初步篩選出粘附力最佳的Carbomer934P和剪切力最佳的CMC-Na2000cp為片芯粘附材料；通過單因素考察并確定片芯最佳處方和工藝如下：Carbomer934P與CMC-Na2000cp比例為1：1，厚度為1mm，直徑為3mm，硬度為4kg。以EC衣膜構(gòu)成腸貼的阻水層能有效阻止LMWH的釋放；以EudragitL100-55為腸溶衣層能實現(xiàn)定位于小腸部位的粘附；片芯含10％以下的吸收促進(jìn)劑一甘氨膽酸鈉不影響腸貼的粘附性能和釋放