ADTZ納米修飾電極的制作以及對真菌毒素ST檢測的研究.pdf

1、　　目的：
　　雜色曲霉素(Sterigmatocystin,ST)是一種致癌,致畸的真菌毒素,現已報道的檢測ST的技術有TLC,HPLC,ELISA以及毒素有關合成基因的PCR檢測,但大多技術比較繁瑣復雜,在此現狀下,本研究以活化的納米材料多壁碳納米管(Multiwall carbon nanotubes,MWNT)作為酶固化載體,構建黃曲霉毒素解毒酶(Aflatoxin-detoxinfizyme,ADTZ)生物傳感器,研究真

2、菌毒素ST的電化學信號,定性定量分析ST,為快速方便的檢測ST提供新的手段和依據。
　　方法：
　　利用5L罐三級發(fā)酵培養(yǎng)產ADTZ的野生菌株E-20,經離子交換層析和疏水作用層析兩種不同純化方案純化ADTZ,制備較高比活力的ADTZ,并通過Native-PAGE電泳對純度進行鑒定。硝酸回流活化MWNT,以直接吸附和共價交聯的方式制備ADTZ酶修飾電極,利用電化學分析技術—循環(huán)伏安法(cyclic voltammogram,

3、CV),微分脈沖伏安法(different pulse voltammogram,DPV),分析檢測得到ST的峰電位和峰電流以及不同濃度的ST與峰電流線性關系。暨南大學2001級碩士學位論文出窗日要
　　結果：
　　(l)通過底物測活和Native于AGE電泳鑒定分別經離子交換層析和疏水作用層析的活性峰,得到離子交換層析的活性峰比活力為68.08u/mg,純化倍數為4.46,疏水作用層析的活性峰比活力為120.0u/mg,純

4、化倍數為ro.92,電泳結果顯示疏水作用層析活性峰蛋白條帶少于離子交換層析。
　　(2)經透射電鏡觀察,硝酸回流12h的MWNT管口末端大多數斷裂,且在1720lun處明顯出現紅外光吸收,以活化MWNT修飾電極的電流響應值相對于裸金電極大大提高。
　　(3)以固化ADTZ修飾電極為工作電極,以loomv/s的掃描速率對ST在一1000mv一+1 Zoomv范圍進行Cv掃描,得出ST的還原峰電位在一600mv位置,氧化峰電位位

5、于+400mv,sT與峰電流的線性方程為iP=0.03c+0.497,RZ=0.9023,線性檢測范圍在4.16X 10一l.33xlo一g/l,檢測下限為4.16xlo一g/l。結 (l)(2)(3)論：疏水作用層析純化的活性峰比活力明顯高于離子交換層析,電泳條帶數目少,酶純度高,在此實驗條件下疏水作用層析相對離子交換層析是相對理想的純化ADTZ的手段,為制備ADTZ酶生物傳感器提供高純度的,高活力的目的酶。酸回流處理12h的MWN

6、T末端大多斷裂開口,在1 720nln出現明顯的光吸收,說明表面帶上了一定數量的毛OOH活性功能基團,為酶的共價固化提供結合點。MWNI勺COOH修飾的金電極峰電流值顯著提高,表明MWNT一COOH不僅可以充當酶固化載體,而且能大大促進電極表面的電子傳遞,充當電子傳遞體,證明MWNT一COOH是極有潛在應用價值的酶電極修飾材料。MWNT一C00H固化ADTZ修飾電極檢測到ST的氧化還原峰電位分別位于一600mv,+400mv位置,重復性