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文檔簡介
1、東北師范大學碩士學位論文百脈根中脫氧葡萄糖篩選表達載體的構建和轉錄因子CBF1的轉化研究姓名:郭喜英申請學位級別:碩士專業(yè):植物學指導教師:王興智邢少辰20070501AbstractAbioticstress,especiallylowtemperature,droughtandhighsalt,hasbeenanegativefactorintheagriculturalactivitiesoverpastyearsandbecom
2、emoreseriousduetothechangeofglobalclimateItisveryimportanttoimprovetheplanttoleranceagainstvariousabioticstressesbymeansofplantmoleculartechnologyinagricultureWiththediscoveryofcoldregulatedgenes,manyresultshavebeenrepor
3、tedthatthosegenesweretransferredintotheplantssuccessfullyandconsequentlyimprovedtheabilityoftoleranceagainstlowtemperatureMostofthesegenesareregulatedbyCBFtranscriptionfactorssOitisanovelchanneltointroducethetranscriptio
4、nfactorgenesintoplantstoimprovecropcoldresistanceInthisstudythedeoxyglucoseselectionsystemwasfirstlysetupincrowtoe(Lotuscorniculatus),andthentheplantexpressionvectorscarryingtranscriptionfactorCBFlweTeconstructedbasedonb
5、otllherbicideanddeoxyglucoseselectionsystemsrespectivelyTransformationofCBFlgenewasperformedbytheAgrobacteriummediatedCO—cultivationmethodThemainresultsareasfollows1Obtainmentofthegenes:AccordingtotheDNAsequenceoftranscr
6、iptionfactorCBFlgenepublishedintheGenBankapairofprimerWasdesignedandsynthesizedUsingthetotalgenomicDNAofArabidopsisthalianaseedlingastemplates,thefulllengthofCBFlgeneWasamplifiedbyPCRandclonedintoTEasyvectorDNAsequencing
7、resultindicatedthatthetargetfragmentshowed100%identitytothegenesequenceintheGenBankTheselectiongeneDOGRlWasobtainedbydigestionofpBinAR::DOG81vectorwithrestrictionenzymesSa/IandEcoRI2Constructionofplantexpressionvectors:T
8、hreeofplantexpressionvectors,includingpCAMBIA3300一CBFl,pCAMBIA5300andpCAMBIA5300CBFl,areconstructedAlltheCBFlandDOG“1genesinthosevectorsaredrovebythesamepromoterCaMV35S3Establishmentofthedeoxyglucoseselectionsystemincrow
9、toe:Thesystemhasbeenbuiltthroughthescreeningofdifferent2deoxyglucoseconcentrationWefoundthatasmallpartofcrowtoecotyledonsdifferentiatedatfwstonthemediumwith600mg,L2deoxyglucose,butdiedgraduallyafterwardsWhentheconcentrat
10、ionof2deoxyglucoseishigherthan1000mg/L,nocrowtoecotyledonscouldbesurvivedtodifferentiate4Obtainmentofthetransgeniccrowtoeanditsinvestigation:Theratesoftransformationbasedonbothdeoxyglucoseselectionandherbicideselectionar
11、esimilarUnderthenormalgrowthconditiontheprolinecontentsintransgenicplantsderivedfrombothselectionsystemsarelitterhigherthanthatofuntransformedplants,andsynchronousincreaseddramaticallyafter4“Ctreatmentreachedthemaximumva
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