塑化劑DNOP對胰島β細胞DNA氧化性損傷機制探討.pdf

1、目的：鄰苯二甲酸二正辛酯（di-n-octy1 phthalate，DNOP）是一種常見的塑化劑，其具有良好的可塑性，因此廣泛應用于塑料制品中。塑料包裝產品中DNOP的急性毒性比較低，人體在一定劑量的攝入后往往沒有急性表現，但其慢性毒性對人類的危害較大，研究發(fā)現:DNOP可通過氧化應激途徑引起胰島素抵抗，進而引發(fā)Ⅱ型糖尿病。吡咯喹啉醌(Pyrroloquinoline-quinone，PQQ)是人體中一種必不可少的生理調節(jié)劑，文獻表明P

2、QQ對由細胞氧化應激引發(fā)的疾病具有一定的治療效果。酒精是生活中常見的物質，其應用范圍十分廣泛，在白酒中有大量的酒精成分，其毒性與細胞氧化應激有關。近期，我國著名品牌白酒中發(fā)現了塑化劑，更提高了人們對酒精與DNOP聯合作用的關注程度。本課題選取大鼠胰島β細胞Ins-1為研究對象，研究DNOP對胰島β細胞Ins-1的毒性機制，并研究PQQ對Ins-1細胞的保護作用及酒精與DNOP的聯合作用。
　　方法：本課題選取大鼠胰島β細胞Ins-

3、1為研究對象，首先使用MTT毒性試驗測定不同濃度DNOP對Ins-1細胞的毒性作用，并確定其半數致死量。使用單細胞凝膠電泳試驗（SCGE）檢測DNOP對大鼠胰島β細胞Ins-1DNA的損傷作用及PQQ對Ins-1細胞DNA的保護作用，酒精的聯合作用。為得出DNOP對Ins-1細胞DNA損傷的相關機制及PQQ的保護作用，酒精的聯合作用，使用苯二醛（OPT）檢測細胞內還原型谷胱甘肽（GSH）含量，使用吖啶橙（AO）檢測細胞內溶酶體膜穩(wěn)定性，

4、使用2’，7’-二氫二氯熒光素（DCFH）來檢測細胞內活性氧（ROS），使用羅丹明123（Rhodamine123）檢測細胞內線粒體膜電位水平。得出Ins-1細胞的還原型谷胱甘肽（GSH）水平，溶酶體穩(wěn)定性水平，細胞內活性氧（ROS）水平及線粒體膜電位水平。在預處理試驗中加入PQQ作為保護劑，觀察各項指標。加入酒精與DNOP，觀察DNOP與酒精的作用結果。試驗結果使用SPSS17.0統(tǒng)計軟件對試驗數據進行統(tǒng)計學分析。
　　結果：在

5、SCGE試驗中，DNOP單獨處理胰島β細胞Ins-1后，使Ins-1細胞的DNA鏈出現斷裂損傷并呈劑量依賴關系。隨著DNOP劑量增加，拖尾現象逐漸增強，尾長、尾距及尾DNA/頭DNA（%）與對照組相比差異具有顯著性；在PQQ預處理組中，胰島β細胞Ins-1的拖尾現象減弱，尾長、尾DNA/頭DNA（%）、尾距均小于同劑量DNOP單獨處理組；在酒精預處理組中，胰島β細胞Ins-1的拖尾現象更強，細胞的尾長、尾DNA/頭DNA（%）、尾距相對

6、于DNOP單獨處理組明顯增強。在細胞內還原型谷胱甘肽（GSH）試驗中，DNOP使Ins-1細胞的GSH水平降低；PQQ預處理組的GSH水平升高；相對于DNOP單獨處理組，酒精預處理組的GSH水平相對于同濃度DNOP單獨處理組降低。在細胞內溶酶體膜穩(wěn)定性試驗中，DNOP單獨處理組的溶酶體膜穩(wěn)定性降低，PQQ預處理組的溶酶體膜穩(wěn)定性升高，酒精預處理組中的溶酶體膜穩(wěn)定性相對于同濃度DNOP單獨處理組有所降低。在細胞內活性氧（ROS）試驗中，D

7、NOP處理組的細胞內ROS水平升高，PQQ預處理組的細胞內ROS水平有所降低，而酒精預處理組的細胞內ROS水平相對于同濃度DNOP處理組有所升高。在細胞內線粒體膜電位測定試驗中，DNOP處理組細胞內線粒體膜電位水平隨濃度增加而降低，PQQ預處理組的線粒體膜電位水平升高，而酒精預處理組的線粒體膜電位水平有所降低。
　　結論：在DNOP引起Ins-1細胞DNA損傷的氧化應激途徑中，DNOP可使細胞的ROS水平升高，GSH水平降低，從而

8、對細胞產生氧化應激損傷，PQQ可減少細胞內ROS的數量，提高細胞的GSH水平，減少細胞氧化應激的損傷，酒精可加重DNOP對Ins-1細胞的氧化應激損傷。在DNOP引起Ins-1細胞DNA損傷的溶酶體—線粒體途徑中，DNOP可使Ins-1細胞的溶酶體膜穩(wěn)定性降低，并使細胞線粒體膜電位水平降低，PQQ可使Ins-1細胞的溶酶體膜穩(wěn)定性升高，線粒體膜電位水平上升，而酒精可使DNOP對溶酶體膜穩(wěn)定性及線粒體膜電位降低，從而加重DNOP對Ins-