雙酚A誘導大鼠胰島INS-1細胞DNA損傷及機制探討.pdf

1、目的:雙酚A(Bisphenol A，BPA)是一種雌激素干擾物，廣泛用于聚碳酸酯和環(huán)氧樹脂的生產過程以及產品中。隨著塑料制品在日常生活中的廣泛應用，人們暴露于雙酚A的機會也逐漸增多。許多動物試驗研究已經證實雙酚A具有生殖毒性作用，并且能夠影響正常的代謝功能。也有研究表明，雙酚A能夠影響胰島細胞的功能并誘發(fā)胰島素抵抗。本試驗旨在了解雙酚A是否會對INS-1細胞產生DNA損傷，并初步探討其可能存在的毒性效應機制。
　　方法:本實驗選

2、擇大鼠胰島β細胞(INS-1)，在不同濃度雙酚A25、50、100μM條件下，采用單細胞凝膠電泳試驗(SCGE)和蛋白質印跡法(western blot)檢測雙酚A誘導的DNA損傷及DNA損傷相關蛋白表達的情況。為了進一步探討研究這種DNA損傷的可能機制，本次試驗采用熒光分子探針2'，7'—二氫二氯熒光素(DCFH)及羥基喜樹堿熒光素(OPT)的方法，檢測細胞內活性氧類物質(ROS)和細胞內還原型谷胱甘肽(GSH)的變化情況，并通過N-

3、乙酰半胱氨酸(NAC)的抗氧化干預試驗，進而說明氧化應激性損傷在DNA損傷中的作用。試驗結果用統(tǒng)計分析軟件SPSS v11.5進行統(tǒng)計分析。
　　結果:彗星試驗顯示雙酚A能夠引起INS-1細胞DNA鏈斷裂，呈彗星樣拖尾，隨著雙酚A試驗劑量的增加核DNA向彗星尾部遷移增多，尾長增加，尾矩以及尾DNA％明顯增大，與DMSO溶劑對照組相比差別顯著，不同劑量組間差別具有統(tǒng)計學意義。蛋白印跡法顯示DNA損傷相關蛋白p53及p-Chk2(T6

4、8)的表達水平明顯升高。發(fā)現試驗細胞內活性氧類物質生成明顯增多，還原型谷胱甘肽水平顯著下降，提示了氧化應激狀態(tài)存在。經N-乙酰半胱氨酸(NAC)抗氧化劑干預后，顯示細胞內活性氧物質生成減少，同時細胞DNA鏈斷裂情況減輕，DNA損傷蛋白p53及p-Chk2(T68)的表達水平相應下降。
　　結論:雙酚A能夠引起INS-1細胞的DNA損傷，造成DNA損傷蛋白(p53，p-Chk2(T68))的表達增加。雙酚A能夠誘導INS-1細胞中活