京尼平苷對棕櫚酸誘導INS-1細胞凋亡的保護及機制研究.pdf

1、2型糖尿病病人體內(nèi)持續(xù)高糖、高脂環(huán)境會產(chǎn)生氧化應激，導致β細胞損傷，最終誘導β細胞凋亡。因此，改善β細胞功能并提高β細胞存活正在成為治療2型糖尿病的重要策略。內(nèi)源性激素胰高血糖素樣肽1(glucagon-likepeptide1,GLP-1)，通過激活其受體，具有刺激葡萄糖依賴的胰島素分泌、促進胰島素的生物合成，誘導胰腺導管細胞分化成內(nèi)分泌細胞和抗凋亡的作用。我們前期研究證實，京尼平苷是一種新的GLP-1受體激動劑，能夠誘導和增強葡萄糖

2、刺激的胰腺β細胞分泌胰島素，并且降低2型糖尿病的血糖，表明京尼平苷在治療2型糖尿病方面有一定的應用開發(fā)價值。本文主要考察京尼平苷對棕櫚酸(palimitate,PA)誘導的INS-1細胞(一種胰腺β細胞系)損傷的保護作用及相關作用機制。
　　MTT實驗結果表明，0.4mMPA/0.5％BSA作用INS-1細胞7小時后，細胞活力下降，京尼平苷可以顯著抑制PA誘導的INS-1細胞氧化損傷。Westernblot實驗結果證實，在PA短時

3、間(1小時)處理的INS-1細胞中，京尼平苷可以明顯提高PKB磷酸化和FoxO1表達水平上調(diào)(P<0.05)，同時抑制JNK的磷酸化水平(P<0.05)。在京尼平苷存在的條件下，PA處理細胞7小時后，京尼平苷能繼續(xù)上調(diào)FoxO1磷酸化，降低JNK的磷酸化水平(P<0.01)，并上調(diào)PDX-1蛋白的表達(P<0.05)，這與FoxO1磷酸化上調(diào)以及JNK下降相一致。說明京尼平苷可能通過調(diào)節(jié)PKB和FoxO1等激酶途徑上調(diào)PDX-1表達，提

4、高細胞活力。
　　為了進一步考察PA長時間處理的細胞中，京尼平苷對細胞活力的影響和相關激酶的調(diào)節(jié)作用，我們將PA處理的時間延長到18小時，結果發(fā)現(xiàn)，0.4mMPA作用細胞18小時后，大部分細胞漂浮，因此我們將PA的劑量減少到0.2mM。流式細胞儀分析結果表明，0.2mMPA/0.5%BSA處理INS-1細胞18小時，也可誘導少量細胞凋亡，京尼平苷也能明顯抑制PA誘導的細胞凋亡(P<0.05)。但是，在0.2mMPA長時間處理的IN

5、S-1細胞中，Westernblot實驗結果表明，PA長時間作用INS-1細胞后，京尼平苷除有上調(diào)磷酸化PKB的作用外(P<0.05)，對JNK磷酸化，PDX-1和Bcl-2等蛋白的表達均無明顯作用。
　　為研究京尼平苷在PA長時間作用時其保護作用下降的原因，我們測定了長時間PA作用INS-1細胞時GLP-1R拮抗劑Ex-3的效應以及GLP-1R的表達。同時，GLP-1R拮抗劑Ex-3也能明顯抑制京尼平苷對PA誘導的INS-1細胞