京尼平苷對(duì)棕櫚酸誘導(dǎo)INS-1細(xì)胞凋亡的保護(hù)及機(jī)制研究.pdf

1、2型糖尿病病人體內(nèi)持續(xù)高糖、高脂環(huán)境會(huì)產(chǎn)生氧化應(yīng)激，導(dǎo)致β細(xì)胞損傷，最終誘導(dǎo)β細(xì)胞凋亡。因此，改善β細(xì)胞功能并提高β細(xì)胞存活正在成為治療2型糖尿病的重要策略。內(nèi)源性激素胰高血糖素樣肽1(glucagon-likepeptide1,GLP-1)，通過(guò)激活其受體，具有刺激葡萄糖依賴(lài)的胰島素分泌、促進(jìn)胰島素的生物合成，誘導(dǎo)胰腺導(dǎo)管細(xì)胞分化成內(nèi)分泌細(xì)胞和抗凋亡的作用。我們前期研究證實(shí)，京尼平苷是一種新的GLP-1受體激動(dòng)劑，能夠誘導(dǎo)和增強(qiáng)葡萄糖

2、刺激的胰腺β細(xì)胞分泌胰島素，并且降低2型糖尿病的血糖，表明京尼平苷在治療2型糖尿病方面有一定的應(yīng)用開(kāi)發(fā)價(jià)值。本文主要考察京尼平苷對(duì)棕櫚酸(palimitate,PA)誘導(dǎo)的INS-1細(xì)胞(一種胰腺β細(xì)胞系)損傷的保護(hù)作用及相關(guān)作用機(jī)制。
　　MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，0.4mMPA/0.5％BSA作用INS-1細(xì)胞7小時(shí)后，細(xì)胞活力下降，京尼平苷可以顯著抑制PA誘導(dǎo)的INS-1細(xì)胞氧化損傷。Westernblot實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，在PA短時(shí)

3、間(1小時(shí))處理的INS-1細(xì)胞中，京尼平苷可以明顯提高PKB磷酸化和FoxO1表達(dá)水平上調(diào)(P<0.05)，同時(shí)抑制JNK的磷酸化水平(P<0.05)。在京尼平苷存在的條件下，PA處理細(xì)胞7小時(shí)后，京尼平苷能繼續(xù)上調(diào)FoxO1磷酸化，降低JNK的磷酸化水平(P<0.01)，并上調(diào)PDX-1蛋白的表達(dá)(P<0.05)，這與FoxO1磷酸化上調(diào)以及JNK下降相一致。說(shuō)明京尼平苷可能通過(guò)調(diào)節(jié)PKB和FoxO1等激酶途徑上調(diào)PDX-1表達(dá)，提

4、高細(xì)胞活力。
　　為了進(jìn)一步考察PA長(zhǎng)時(shí)間處理的細(xì)胞中，京尼平苷對(duì)細(xì)胞活力的影響和相關(guān)激酶的調(diào)節(jié)作用，我們將PA處理的時(shí)間延長(zhǎng)到18小時(shí)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，0.4mMPA作用細(xì)胞18小時(shí)后，大部分細(xì)胞漂浮，因此我們將PA的劑量減少到0.2mM。流式細(xì)胞儀分析結(jié)果表明，0.2mMPA/0.5%BSA處理INS-1細(xì)胞18小時(shí)，也可誘導(dǎo)少量細(xì)胞凋亡，京尼平苷也能明顯抑制PA誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡(P<0.05)。但是，在0.2mMPA長(zhǎng)時(shí)間處理的IN

5、S-1細(xì)胞中，Westernblot實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，PA長(zhǎng)時(shí)間作用INS-1細(xì)胞后，京尼平苷除有上調(diào)磷酸化PKB的作用外(P<0.05)，對(duì)JNK磷酸化，PDX-1和Bcl-2等蛋白的表達(dá)均無(wú)明顯作用。
　　為研究京尼平苷在PA長(zhǎng)時(shí)間作用時(shí)其保護(hù)作用下降的原因，我們測(cè)定了長(zhǎng)時(shí)間PA作用INS-1細(xì)胞時(shí)GLP-1R拮抗劑Ex-3的效應(yīng)以及GLP-1R的表達(dá)。同時(shí)，GLP-1R拮抗劑Ex-3也能明顯抑制京尼平苷對(duì)PA誘導(dǎo)的INS-1細(xì)胞