京尼平苷對大鼠胰島素分泌的影響及機制研究.pdf

1、目的：
　　京尼平苷是梔子的主要藥效成分，屬于環(huán)烯醚萜葡萄糖苷類化合物，具有抗糖尿病、抗炎、抗氧化、利膽保肝等作用，本課題旨在研究在離體大鼠胰島組織及胰島β細胞中京尼平苷對胰島素分泌的調(diào)控作用及其潛在機制，為京尼平苷作為糖尿病治療藥物提供一定的理論依據(jù)。
　　方法：
　　（1）選用雄性SD大鼠，處死后將其腹部在無菌狀態(tài)下剖開，充分暴露胰腺及周圍區(qū)域，將1mg/ml膠原酶P經(jīng)膽總管注入胰腺并剝離，37℃水浴消化11分鐘，

2、中止消化，震蕩混勻，行梯度離心獲得胰島。取適量胰島，用dispaseⅡ消化5分鐘，得到單個胰島細胞。（2）在顯微鏡下挑取生長良好的胰島，用放射免疫法檢測京尼平苷及其它干預藥物對大鼠胰島素分泌及cAMP含量的影響。（3）采用膜片鉗技術(shù)進行各實驗組的鉀通道、鈣通道電流及動作電位的記錄。（4）應用鈣熒光成像系統(tǒng)和熒光顯微鏡觀察京尼平苷對細胞內(nèi)鈣離子濃度的影響情況。
　　結(jié)果：
　?。?）在8.3mmol/L的葡萄糖條件下，不同濃度

3、的京尼平苷（1、10、100μmol/L）劑量依賴性的促進胰島素分泌，在10μmol/L時達到最大促泌效應，低糖（2.8mmol/L）下則無作用。（2）隨葡萄糖濃度升高（2.8、8.3、16.7mmol/L），京尼平苷（10μmol/L）促胰島素分泌作用逐漸增強。（3）在8.3mmol/L葡萄糖條件下，GLP-1R拮抗劑Exendin(9-39)（100nmol/L）、腺苷酸環(huán)化酶（AC）抑制劑SQ22536（10μmol/L）和PKA

4、抑制劑H89（1μmol/L）均可消除京尼平苷（10μmol/L）的促胰島素分泌作用。（4）京尼平苷（10μmol/L）使胰島cAMP的含量增加，Exendin(9-39)和SQ22536均可消除其作用，AC激動劑Forsklin（1μmol/L）明顯增加胰島cAMP的含量。（5）膜片鉗實驗表明，京尼平苷可抑制電壓依賴性鉀通道（Kv）電流，呈劑量依賴性，且在10μmol/L時達到最大抑制作用（京尼平苷組，73.40±6.62 pA/pF

5、；對照組，139.19±12.74 pA/pF），Exendin(9-39)以及PKA抑制劑H89、KT5720(100 nmol/L)均可逆轉(zhuǎn)京尼平苷對Kv的抑制作用。此外，京尼平苷（10μmol/L）可延長胰島β細胞的動作電位時程（京尼平苷，59.13±3.76 ms vs.對照組，28.96±3.02 ms），還可使胰島β細胞鈣通道電流密度增大（0mV下，京尼平苷組為-9.23±0.42 pA/pF，對照組為-5.94±0.19