TCF7L2影響胰島素分泌機制的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：探討TCF7L2影響葡萄糖分泌的機制。轉錄因子TCF7L2與GPR40基因啟動子的相互作用。研究慢病毒介導RNA干擾(RNAi)致TCF7L2基因沉默對胰島p細胞GPR40表達的影響。
　　方法：(1)采用染色質免疫沉淀(CHIP)技術，在胰島βTC6細胞株中，用TCF7L2特異性抗體沉淀DNA，聚合酶聯式反應(PCR)檢測GPR40基因5’特異性序列。(2)構建小鼠TCF7L2基因RNAi慢病毒載體，感染小鼠胰島βTC6細

2、胞株，進行Real time-PCR及Westernblotting鑒定干擾效率；(3)檢測對照組與干擾組葡萄糖刺激后胰島素分泌(GSIS)情況；(4)Real time-PCR及Western blotting檢測TCF7L2穩(wěn)定下調的小鼠胰島βTC6細胞中GPR40mRNA以及蛋白水平。
　　結果：(1)在TCF7L2特異性抗體免疫沉淀的DNA片段中，擴增出GPR40基因5’特異性序列。(2)成功構建小鼠TCF7L2基因RNA

3、i慢病毒載體，使小鼠胰島βTC6細胞中TCF7L2 mRNA以及蛋白水平顯著下調，TCF7L2的mRNA表達量較空白組與對照組分別下降72％以及78％(P<0.05)，TCF7L2的蛋白量顯著低于對照組(P<0.05)；(3)干擾組中葡萄糖刺激的胰島素分泌較對照組下降(P<0.05)；(4)TCF7L2基因穩(wěn)定下調后，胰島βTC6細胞中GPR40mRNA以及蛋白水平明顯下調，GPR40的mRNA表達量較空白組與對照組分別下降78％以及8

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