6-姜酚對過氧化氫致INS-1細(xì)胞DNA損傷的保護(hù)作用及機(jī)制探討.pdf

1、目的：隨著生活方式和飲食結(jié)構(gòu)的改變，糖尿病患病人數(shù)逐年遞增，糖尿病已成為21世紀(jì)全球面臨的最嚴(yán)重、最危急的健康問題之一。6-姜酚作為姜酚最重要的活性成分，具有抗氧化、抗炎、抗腫瘤、調(diào)節(jié)血糖等廣泛的藥理學(xué)作用。6-姜酚在防治糖尿病及其并發(fā)癥方面有著廣闊的應(yīng)用前景，但其具體的作用機(jī)制尚不十分清楚。本實驗通過觀察6-姜酚對過氧化氫（H2O2）所致大鼠胰島細(xì)胞（INS-1 cells）毒性是否具有保護(hù)作用，旨在從細(xì)胞水平探討6-姜酚防治糖尿病的

2、分子機(jī)制，為糖尿病治療開拓新的方法，為新型藥物和生姜保?。üδ埽┦称返拈_發(fā)提供必要的依據(jù)。
　　方法：本實驗選擇INS-1細(xì)胞作為研究對象，用H2O2（100μM）作用于INS-1細(xì)胞1 h，造成INS-1細(xì)胞氧化性損傷。采用6-姜酚作為保護(hù)劑，在加入H2O2之前加入6-姜酚預(yù)處理24 h，觀察不同劑量6-姜酚（2.5μM、5μM、10μM）對細(xì)胞損傷的保護(hù)作用。用單細(xì)胞凝膠電泳（SCGE）試驗檢測INS-1細(xì)胞DNA鏈斷裂的情況

3、；應(yīng)用熒光分光光度計測定細(xì)胞內(nèi)ROS和 GSH水平的改變、溶酶體膜穩(wěn)定性及線粒體膜電位的變化；應(yīng)用RT-PCR方法測定ATM、p53基因的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：H2O2（100μM）作用于INS-1細(xì)胞1 h后，細(xì)胞出現(xiàn)彗星樣拖尾，與對照組相比，尾長、尾部DNA/頭部DNA（%）和尾矩均明顯增大（P<0.01）；經(jīng)6-姜酚預(yù)處理24 h，再加入H2O2（100μM）作用1 h后，SCGE試驗彗星樣拖尾減輕，尾部DNA/頭部DNA（

4、%）明顯下降（P<0.05或P<0.01），尾長及尾矩明顯減少（P<0.01）。
　　H2O2作用于INS-1細(xì)胞1 h后，與對照組相比，細(xì)胞內(nèi)ROS水平升高（P<0.01），GSH水平降低（P<0.01），使細(xì)胞處于氧化應(yīng)激狀態(tài)；經(jīng)不同濃度6-姜酚預(yù)處理24 h，再與H2O2作用1 h后，與H2O2組相比，細(xì)胞內(nèi)ROS水平顯著降低（P<0.05或P<0.01），GSH水平顯著升高（P<0.05或P<0.01）。
　　H2O

5、2作用于INS-1細(xì)胞1 h后，與對照組相比，細(xì)胞內(nèi)溶酶體膜穩(wěn)定性顯著下降（P<0.01），線粒體膜電位明顯降低（P<0.01）；經(jīng)不同濃度6-姜酚預(yù)處理24h，再與H2O2作用1 h后，與H2O2組相比，溶酶體膜穩(wěn)定性顯著上升（P<0.01），線粒體膜電位顯著升高（P<0.05）。
　　H2O2作用于INS-1細(xì)胞1 h后，與對照組相比，細(xì)胞內(nèi)ATM、p53基因表達(dá)量顯著增加（P<0.01）；經(jīng)不同濃度6-姜酚預(yù)處理24h，再與