激肽釋放酶的仿生親和純化研究.pdf

1、激肽釋放酶所具有的多種生理功能,使它成為了一種重要的臨床用藥.目前主要用于微循環(huán)障礙性疾病,如糖尿病引起的腎病,周圍神經(jīng)病,視網(wǎng)膜病,眼底病及缺血性腦血管病,以及高血壓病的輔助治療.近年來隨著糖尿病患者的增多,對激肽釋放酶的需求量也日益增加.市場上現(xiàn)有的激肽釋放酶產(chǎn)品主要為豬胰激肽釋放酶,也有少量為人尿激肽釋放酶.盡管已有實(shí)驗(yàn)室報(bào)道成功構(gòu)建了人組織激肽釋放酶的真核表達(dá)系統(tǒng)和原核表達(dá)系統(tǒng),但由于存在著表達(dá)量低、產(chǎn)物活性低等缺點(diǎn),自今尚未見

2、用作工業(yè)生產(chǎn)的報(bào)道.而豬胰臟因其具有來源豐富,價(jià)格低廉等優(yōu)點(diǎn),目前仍是臨床用藥的主要來源.而當(dāng)前所用的純化工藝多為離子交換法或固定化底物(approtinin)親和層析法,存在著回收率低、使用壽命短等缺點(diǎn).因此,進(jìn)行激肽釋放酶純化新工藝研究具有重要理論意義和經(jīng)濟(jì)意義.該實(shí)驗(yàn)是以脫脂的豬胰酶粗粉為原料,根據(jù)激肽釋放酶的空間結(jié)構(gòu)和其對底物的結(jié)合特點(diǎn),以激肽釋放酶的最佳底物--Phe-Arg二肽為模型,設(shè)計(jì)并合成了六種以三氮嗪為母核的小分子染

3、料配基來對激肽釋放酶進(jìn)行仿生親和純化,并從中篩選出了一種結(jié)合力較強(qiáng),特異性較高的配基--Trp介質(zhì).在將上樣、洗脫條件優(yōu)化(pH8,電導(dǎo)為3.5ms上樣;pH8.5,電導(dǎo)10ms洗脫)后,單獨(dú)使用該介質(zhì)可一步從豬胰丙酮粗粉中純化出比活性為350KU/mg的激肽釋放酶樣品,比原樣比活提高了290倍,回收率為68％.而將該柱和DEAE-FF-Sepharose聯(lián)用,所得洗脫液中激肽釋放酶比活可達(dá)1300KU/mg,比原樣(丙酮粗粉)比活提高