雌二醇降解菌多食鞘氨醇ED4產(chǎn)酶條件優(yōu)化及酶學(xué)性質(zhì)研究.pdf

1、雌激素是一種在自然界中普遍存在的污染物，其具有危害大、難降解等特點(diǎn)，如何有效的去除環(huán)境中的雌激素污染，且不造成二次污染，成為人們亟待解決的問題。本文以實(shí)驗(yàn)室篩選保藏的雌二醇降解菌ED4為出發(fā)菌株，優(yōu)化產(chǎn)酶條件，利用超聲波破碎法提取雌二醇降解酶，并對(duì)其的降解機(jī)理和酶學(xué)性質(zhì)做進(jìn)一步的研究。
　　通過降解酶定位實(shí)驗(yàn)確定雌二醇降解酶屬于胞內(nèi)酶。利用單因素實(shí)驗(yàn)優(yōu)化雌二醇降解菌Sphingo.multivorum.ED4的產(chǎn)酶條件，發(fā)現(xiàn)在添加

2、1％的葡萄糖為補(bǔ)充碳源、蛋白胨為氮源的產(chǎn)酶培養(yǎng)基中，設(shè)置培養(yǎng)溫度為30℃，初始pH為7.0，種子活化時(shí)間為24h，接種量為2％，將菌株培養(yǎng)72h后，ED4產(chǎn)酶量最大，酶活力達(dá)到1.425IU/mL，相比優(yōu)化前的酶活提高了1.223倍。
　　利用超聲波破碎法提取ED4雌二醇降解酶，通過單因素實(shí)驗(yàn)確定破碎時(shí)間、破碎功率和菌體濃度對(duì)超聲破碎效果的影響，結(jié)合Design-expert8.0.7.1軟件做進(jìn)一步進(jìn)行響應(yīng)面法優(yōu)化破碎條件，確定

3、最佳的超聲破碎條件是:破碎功率400W、破碎時(shí)間29min、菌體濃度為188mg/mL，在此條件下得到雌二醇降解酶酶活力為1.477IU/mL。
　　關(guān)于酶學(xué)性質(zhì)的研究確定，雌二醇降解酶的最適pH為7.0，最適反應(yīng)溫度為30℃，當(dāng)儲(chǔ)存條件的pH為7.0～8.0、溫度范圍為30～35℃時(shí)，有較好的穩(wěn)定性?？疾旖饘匐x子對(duì)酶促反應(yīng)的影響發(fā)現(xiàn)，Al3+和Sn2+等離子對(duì)酶促反應(yīng)有抑制作用，而Mg2+和Ca2+等離子在不同程度上促進(jìn)雌二醇酶