鎘誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡機(jī)理的研究.pdf

1、鎘能誘導(dǎo)機(jī)體內(nèi)多種細(xì)胞發(fā)生凋亡.進(jìn)行鎘誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的研究對(duì)治療由鎘引起的各種疾病有重要意義.該文對(duì)鎘誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡發(fā)生的機(jī)制做了如下的研究:1.鎘引起SD大鼠腎細(xì)胞的凋亡及鈣穩(wěn)態(tài)的失調(diào).在37℃、5﹪C0<,2>條件下,離體SD大鼠腎細(xì)胞分別在含不同濃度氯化鎘和亞硒酸鈉加氯化鎘的FD培養(yǎng)液中孵育3h后,用吖啶橙/溴乙錠雙熒光染色法檢測(cè)細(xì)胞的凋亡率,以Fluo-3/AM為探針研究胞內(nèi)游離鈣離子濃度的變化.結(jié)果顯示:不同濃度的鎘離子能不同程度

2、地誘導(dǎo)SD大鼠腎細(xì)胞的凋亡,同時(shí)還能引起不同程度的細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度增加,并呈現(xiàn)劑量效應(yīng)正相關(guān).低濃度的亞硒酸鈉有一定的降低鎘離子誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用.提示:鎘能引起離體SD大鼠腎細(xì)胞的凋亡并引起胞內(nèi)鈣穩(wěn)態(tài)的失調(diào).2.鎘誘導(dǎo)HEK293細(xì)胞胞內(nèi)鈣穩(wěn)態(tài)的失調(diào)引發(fā)細(xì)胞凋亡.通過吖啶橙/溴乙錠雙熒光染色法檢測(cè)細(xì)胞凋亡,并通過MTT法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制;以Fluo-3/AM和Fura-2/AM為探針檢測(cè)胞漿內(nèi)游離鈣離子濃度([Ca<'2+>]<,

3、i>)的變化;使用鈣調(diào)磷酸酶試劑盒測(cè)定鎘對(duì)鈣調(diào)磷酸酶活性的影響.結(jié)果顯示:鎘誘導(dǎo)HEK293細(xì)胞的凋亡和生長(zhǎng)抑制呈濃度依賴性;鎘通過引發(fā)胞內(nèi)鈣庫(kù)的釋放后引起胞外鈣離子的內(nèi)流;鈣信號(hào)的阻斷劑能顯著的抑制鎘引起的細(xì)胞凋亡;鎘使胞內(nèi)鈣調(diào)磷酸酶的活性顯著增加.提示:鎘誘導(dǎo)胞內(nèi)鈣穩(wěn)態(tài)的失調(diào)可能在鎘引發(fā)細(xì)胞凋亡過程中起重要作用.3.鎘誘導(dǎo)HEK293細(xì)胞線粒體細(xì)胞色素C釋放引起細(xì)胞凋亡.分別以羅丹明123和DCFH-DA為探針檢測(cè)細(xì)胞的線粒體膜電位