基于Akt-mTOR通路的白藜蘆醇抗鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡機(jī)理研究.pdf

1、本研究采用細(xì)胞培養(yǎng)、臺(tái)盼藍(lán)染色、DAPI和TUNEL染色、RNA干擾、Western blot分析等細(xì)胞分子生物學(xué)技術(shù)和方法，以PC12細(xì)胞和小鼠原代神經(jīng)元為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，研究了白藜蘆醇對(duì)鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響，深入探討白藜蘆醇靶向mTOR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抗鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡和S6K1在此過(guò)程的重要作用。結(jié)果如下:
　　1 白藜蘆醇通過(guò)抑制Akt/mTOR通路抗鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡
　　PC12細(xì)胞和小鼠原代神經(jīng)元用白藜蘆醇（100μM

2、）預(yù)處理1h后暴露于鎘（10和20μM）8h或24h。Western blot分析Akt/mTOR通路相關(guān)蛋白表達(dá);臺(tái)盼藍(lán)和DAPI染色分別分析活細(xì)胞數(shù)量和凋亡細(xì)胞表現(xiàn)。結(jié)果顯示:鎘以濃度依賴(lài)的方式誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞Akt、mTOR、S6K1、S6、4E-BP1磷酸化增加，這被白藜蘆醇有力地阻滯;與之一致的，白藜蘆醇顯著減低鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞活性下降和凋亡。這些結(jié)果表明白藜蘆醇抑制Akt/mTOR通路抗鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡。
　　2 白藜蘆醇

3、靶向mTOR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抗鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡
　　以PC12細(xì)胞和小鼠原代神經(jīng)元為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，細(xì)胞用雷帕霉素(200ng/ml)預(yù)處理48h后再用白藜蘆醇（100μM）預(yù)處理1h，接著暴露于鎘（10μM）8h或24h。Western blot分析相關(guān)蛋白表達(dá);臺(tái)盼藍(lán)和TUNEL染色分別分析活細(xì)胞數(shù)量和凋亡細(xì)胞表現(xiàn)。結(jié)果顯示:雷帕霉素強(qiáng)化白藜蘆醇抑制鎘誘導(dǎo)Akt、mTOR、S6K1、4E-BP1磷酸化和Cleaved-caspase-3增

4、加;與之一致的，雷帕霉素也有效增強(qiáng)白藜蘆醇抵抗鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞活性下降以及TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞升高。這些結(jié)果表明白藜蘆醇靶向mTOR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抗鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡。
　　3 S6K1在白藜蘆醇抗鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡中有重要作用
　　分別感染Ad-S6K1-ca和Ad-LacZ（作為對(duì)照）的PC12細(xì)胞用白藜蘆醇(100μM)或PP242（1μM）預(yù)處理1h后暴露于鎘（10μM）8h或24h。Western blot分析相關(guān)蛋白表達(dá);