受者來(lái)源的PIR-B轉(zhuǎn)染的樹(shù)突狀細(xì)胞對(duì)小鼠異基因骨髓移植GVHD的保護(hù)作用.pdf

1、第一部分，目的：建立一個(gè)穩(wěn)定可靠的異基因骨髓移植（allogeneic bone marrow transplantation,allo-BMT）小鼠急性移植物抗宿主病（acut graft-versus-host disease, aGVHD）動(dòng)物模型，為后期實(shí)研究驗(yàn)allo-BMT后aGVHD和移植耐受提供理想的實(shí)驗(yàn)平臺(tái)。
　　 方法：將供者C57BL/6J（H-2b）雄性小鼠骨髓細(xì)胞和脾細(xì)胞按不同比例（1：1和1：2）混合

2、，輸入接受致死性全身照射（8.5Gy）的受鼠雌性BALB/C（H-2d）小鼠以引起不同程度的aGVHD，檢測(cè)嵌合體情況，根據(jù)受鼠的一般情況、臨床表現(xiàn)、生存期和組織病理學(xué)等判斷aGVHD 程度。
　　 結(jié)果：混合不同比例的供鼠骨髓細(xì)胞和脾細(xì)胞allo-BMT的小鼠均發(fā)生了aGVHD，但出現(xiàn)aGVHD的時(shí)間和程度均有差異。其中骨髓與脾細(xì)胞1：2組小鼠可在相對(duì)集中的時(shí)間內(nèi)觀察到典型的aGVHD 臨床和病理改變，所有小鼠均在14-24d

3、死亡。骨髓與脾細(xì)胞1：1組aGVHD 程度較輕，移植后4周小鼠均全部存活。
　　 結(jié)論：骨髓細(xì)胞和脾細(xì)胞比例為1：2組比1：1組出現(xiàn)更典型的aGVHD,其發(fā)病和死亡時(shí)間較集中。選定TBI8.5Gy及細(xì)胞移植的混合比例（1：2）構(gòu)建小鼠aGVHD模型，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供理想模型。
　　 第二部分，目的：探討不同方法誘導(dǎo)的受者來(lái)源樹(shù)突狀細(xì)胞（dendritic cells, DCs）輸注對(duì)異基因骨髓移植（allogeneic b

4、one marrow transplantation, allo-BMT）小鼠急性移植物抗宿主?。╝cut graft-versus-host disease,aGVHD）和造血重建的影響。
　　 方法：受鼠為雌性BALB/C（H-2d）小鼠，供鼠為雄性C57BL/6J（H-2b）小鼠。無(wú)菌分離受鼠骨髓細(xì)胞（bone marrow cell, BMC），與GM-CSF 共培養(yǎng)得到未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞（immature dendrit

5、ic cells, imDCs）；受鼠BMC與GM-CSF、IL-10共培養(yǎng)得到IL-10-DCs；用配對(duì)性免疫球蛋白樣受體B （Pairedimmunoglobin-like receptor B，PIR-B）慢病毒載體轉(zhuǎn)染imDCs 得到PIR-B-DCs。
　　 受鼠隨機(jī)分為四組，在移植骨髓后分別予尾靜脈注射imDCs、IL-10-DCs、PIR-B-DCs和RPMI1640培養(yǎng)液。以移植后aGVHD 臨床表現(xiàn)，肝臟、小腸

6、、皮膚病理組織改變，生存期為觀察指標(biāo)并進(jìn)行組間比較。
　　 結(jié)果：PIR-B-DCs 移植組、IL-10-DCs 移植組、imDCs 移植組和單純移植組受鼠平均生存時(shí)間為（46.0±13.6）天、（36.4±13.0）天、（21.6±2.8）天和（17.4±3.6）天， p<0.01；4組小鼠在移植后15天GVHD 臨床評(píng)分為（5.28±0.27）、(5.26±0.31)、(2.46±0.18)和(0.86±0.21)，p<0.