淋巴淤滯對肥胖大鼠胰組織結構和血糖的影響.pdf

1、目的：糖尿病(diabetes mellitus，DM)是一種因體內(nèi)胰島素分泌相對或絕對不足所導致的一系列代謝紊亂綜合癥，臨床上以血糖升高為主要特點。在國際上，糖尿病可分為1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病及其他特殊類型的糖尿??；其中，2型糖尿病患者超過95％。胰島素作為機體唯一降血糖激素，目前，對于胰島素在細胞內(nèi)的合成過程，已經(jīng)有了比較明確的闡述。傳統(tǒng)知識認為，機體內(nèi)分泌器官產(chǎn)生的激素，通過血液循環(huán)，轉運到全身各靶器官發(fā)揮作用。近年來

2、，有學者在淋巴系統(tǒng)中檢測到胰島素的存在，這一發(fā)現(xiàn)提示，在生理狀態(tài)下，淋巴系統(tǒng)可能是胰島素的重要轉運途徑。胰島素和胰淀素作為大分子多肽物質(zhì)，按一定的比例同步產(chǎn)生、分泌到胰島細胞外，它們之間存在密切的聯(lián)系。病理解剖學報道：胰島細胞及其周圍胰淀素沉積，是早期2型糖尿病患者的典型病理改變。本實驗主要設計胰腺淋巴回流障礙的實驗動物模型，進一步闡述胰淀素等多肽激素的淋巴轉運途徑以及胰腺的組織結構和血糖變化。
　　肥胖(obesity)是指一定

3、程度的明顯超重與脂肪層過厚，是由體內(nèi)脂肪(尤其是甘油三酯)積聚過多而導致的一種病理狀態(tài)?？偹苤?，肥胖尤其是內(nèi)臟肥胖與2型糖尿病發(fā)病率呈正相關，但是，其具體的發(fā)病機制目前尚不完全明確。脂質(zhì)物質(zhì)，尤其是由腸道吸收攝入的脂肪，約有80％～90％經(jīng)小腸絨毛上的毛細淋巴管(或稱中央乳糜管)吸收，當脂肪攝入過多，勢必會增加淋巴循環(huán)的轉運負荷。本實驗將在脂質(zhì)和胰淀素等多肽類激素的轉運途徑上，進一步闡述淋巴循環(huán)對于肥胖大鼠胰腺組織結構和血糖的影響。<

4、br>　　方法：
　　1實驗動物分組與模型制備
　　選用40只健康1月齡SD大鼠，雌雄不拘，體重約100克，身長約12厘米，由河北醫(yī)科大學實驗動物中心提供。隨機分為兩組：A組，正常飲食組(20只)；B組，高脂飲食組(20只)。將實驗動物隨機分組后，A組給予正常飼料，B組給予特殊配制的高脂飼料。10周后A組隨機分為A1假手術組(10只)；A2手術組(10只)；B組也隨機分為B1假手術組(10只)；B2手術組(10只)。

5、　　每周檢測實驗大鼠的身長、體重和空腹血糖。10周后行胸導管結扎手術，術前半小時用植物油灌胃，在6％水合氯醛腹腔注射全身麻醉下，經(jīng)腹腔在膈腳下結扎緊貼腹主動脈后壁的乳白色胸導管。假手術組充分游離胸導管而不結扎，術后仍然分組飼養(yǎng)，每周采鼠尾血檢測空腹血糖、測量體重，觀測各項生理變化。結扎胸導管后分普通飼料和高脂飼料喂養(yǎng)6個月，在水合氯醛腹腔注射全身麻醉下，開腹觀察各腹腔臟器的變化，并快速切取胰腺組織標本，置于適當保存液中，制備光鏡和電鏡樣

6、品。
　　2普通光鏡樣品制備與觀察
　　胰腺標本做適當處理后，經(jīng)冰凍、石蠟包埋切片，進行常規(guī)HE染色、胰淀素免疫組織化學染色，比較各組胰腺組織結構的細微變化。
　　3透射電鏡樣品制備與觀察
　　胰腺經(jīng)醛類固定后，經(jīng)樹酯包埋做半薄切片定位，用美藍染色后首先在光鏡下確定胰島的存在，然后選取胰島區(qū)域進行觀察，比較各組胰腺(主要是胰島)組織結構的超微變化。
　　4掃描電鏡樣品制備與觀察
　　部分胰腺標本經(jīng)過醛

7、類固定液固定后，經(jīng)過常規(guī)導電、固定、脫水、真空干燥等處理后，固定于電鏡樣品托上，觀察胰腺表面的結構特點。
　　結果：
　　1胰腺的大體觀察
　　高脂飲食組(B組)與正常飲食組(A組)相比：腹壁、腸系膜等腹膜下，顯示輕微的脂質(zhì)沉積，油膩感，胰腺組織顏色略淡，周圍組織輕微粘連。
　　手術組(A2組、B2組)與假手術組(A1組、B1組)相比：各腹腔臟器及腸系膜等處，出現(xiàn)明顯的脂質(zhì)沉積，同時胰腺有明顯脂質(zhì)覆蓋，與肝臟等周

8、圍組織出現(xiàn)粘連。
　　2光鏡觀察
　　(1)HE染色的組織切片，除A1組外，其余三組實驗大鼠的胰組織，均有不同程度的胰島淀粉樣改變，表現(xiàn)為胰島細胞排列紊亂、腫脹甚至凋亡，細胞間質(zhì)疏松；胰腺小葉間散在空泡狀改變，結締組織增生。
　　(2)胰淀素免疫組織化學染色的胰組織切片，A1組胰島淡染、無明顯的陽性反應；其余三組實驗動物在胰腺，尤其是胰島細胞及其周圍，均出現(xiàn)不同程度的棕褐色陽性反應。經(jīng)Imagepro-plus6.0圖

9、像分析后，計算平均光密度值，各組間比較B2＞A2＞Bl＞A1。
　　3超薄組織切片的透射電鏡觀察
　　在高脂飲食假手術組(B1組)和胸導管結扎組(A2組、B2組)的大鼠胰腺組織，可見到胰島細胞間隙增寬、擴大；胰島細胞分泌顆粒增多，暈環(huán)增大。此外，胰島細胞周圍常見散在的炎癥細胞。
　　4胰腺組織表面掃描電鏡觀察
　　大鼠胰腺為腹膜內(nèi)位器官，表面覆蓋由扁平上皮細胞構成的腹膜；與正常假手術組相比，胸導管結扎組胰腺腹膜上

10、皮細胞表面及邊緣部位的微絨毛明顯增多，相鄰幾個上皮細胞之間的間隙明顯增大。
　　5實驗大鼠各項生理指標比較
　　喂養(yǎng)10周時，B組大鼠的體重、Lee's指數(shù)、血糖均明顯升高，經(jīng)SPSS統(tǒng)計軟件分析具有顯著差異性(P＜0.05)，可以認為B組成功建立營養(yǎng)性肥胖大鼠動物模型。
　　術后6個月時，A1組血糖變化不明顯，其余各組血糖出現(xiàn)不同程度升高。各組間比較，血糖升高水平呈現(xiàn)B2＞A2＞B1，經(jīng)SPSS統(tǒng)計軟件分析具有顯著差