實(shí)驗(yàn)性淋巴瘀滯誘發(fā)胰組織結(jié)構(gòu)及內(nèi)分泌和代謝的變化.pdf

1、器官的正常淋巴回流，對(duì)于維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的相對(duì)穩(wěn)定，具有重要的功能意義。在大分子物質(zhì)（如胰島素等多肽激素和長(zhǎng)鏈脂肪酸）的吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)，炎癥擴(kuò)散和腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移等諸多生理及病理過(guò)程中，胰腺的淋巴管系統(tǒng)起著極其重要的作用。
　　 如果胰腺的淋巴回流途徑被阻斷，會(huì)對(duì)胰組織結(jié)構(gòu)和糖脂代謝產(chǎn)生什么樣的影響?目前，尚未見(jiàn)相關(guān)的實(shí)驗(yàn)研究報(bào)道。
　　 分子生物學(xué)和形態(tài)學(xué)研究表明，胰淀肽屬于胰島B細(xì)胞的正常分泌產(chǎn)物；胰腺內(nèi)出現(xiàn)胰淀肽沉積是2型糖

2、尿病典型的早期病理特征。隨著胰島內(nèi)胰淀肽沉積的加重，胰島細(xì)胞的數(shù)量也在逐漸減少；胰島細(xì)胞被胰淀肽沉積取代的多少，決定了2型糖尿病的發(fā)展或嚴(yán)重程度。胰淀肽為什么會(huì)形成淀粉樣蛋白沉積，并進(jìn)一步影響胰島的內(nèi)分泌功能?在不同的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中，關(guān)于胰淀肽能否形成胰島淀粉樣變，胰淀肽等大分子物質(zhì)的正常轉(zhuǎn)運(yùn)途徑是直接進(jìn)入毛細(xì)血管，還是通過(guò)毛細(xì)淋巴管吸收經(jīng)淋巴運(yùn)輸間接進(jìn)入血液，淋巴回流受阻是否影響胰島淀粉樣變的因素，仍需深入研究。
　　 本實(shí)驗(yàn)分為

3、四部分，在對(duì)大鼠胸導(dǎo)管進(jìn)行詳細(xì)解剖的基礎(chǔ)上，將其胸導(dǎo)管進(jìn)行選擇性有效結(jié)扎，造成淋巴回流阻滯的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，利用組織切片的常規(guī)HE染色和剛果紅染色，免疫組織化學(xué)染色方法，對(duì)正常和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的胰腺組織標(biāo)本，進(jìn)行光鏡和透射電鏡觀察，探討實(shí)驗(yàn)動(dòng)物胰腺組織的細(xì)微和超微結(jié)構(gòu)變化，觀察胰淀肽在胰島及其周?chē)某练e情況；檢測(cè)正常和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的血糖、血脂、胰島素和C.肽的變化。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和結(jié)果如下：
　　 第一部分結(jié)扎大鼠胸導(dǎo)管誘發(fā)胰淋巴瘀滯模型的建立<

4、br>　　 目的：本實(shí)驗(yàn)擬在對(duì)大鼠胸導(dǎo)管進(jìn)行詳細(xì)解剖的基礎(chǔ)上，將其胸導(dǎo)管進(jìn)行選擇性有效結(jié)扎，造成淋巴回流阻滯的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，并通過(guò)形態(tài)學(xué)觀察進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　 方法：選用10月齡SD大鼠20只（由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供），雌雄各半，分籠飼養(yǎng)，隨機(jī)分為兩組，實(shí)驗(yàn)（手術(shù)）組和對(duì)照（假性手術(shù)）組；實(shí)驗(yàn)前30～60分鐘用植物油2～5毫升灌胃，用6％水合氯醛（5ml/kg）腹腔注射麻醉，在手術(shù)顯微鏡下，假性手術(shù)組只充分游離胸導(dǎo)管而不

5、結(jié)扎。手術(shù)組在充分暴露胸導(dǎo)管的基礎(chǔ)上，于腹部膈腳下將其結(jié)扎。選擇在腹部對(duì)大鼠胸導(dǎo)管起始部，進(jìn)行結(jié)扎造模，以減少結(jié)扎副作用和提高造模成功率。術(shù)后的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，常規(guī)喂養(yǎng)。造模術(shù)后6個(gè)月的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，在6％水合氯醛（5ml/kg）腹腔注射深度麻醉下，快速切取大鼠胰組織標(biāo)本，部分胰腺標(biāo)本行石蠟包埋和組織切片，行常規(guī)HE和剛果紅染色或免疫組織化學(xué)染色后光鏡觀察。
　　 結(jié)果：
　　 1.大鼠胰組織切片HE染色光鏡觀察顯示，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照

6、組相比，胰腺小葉間隙顯著增寬，出現(xiàn)明顯的淋巴管擴(kuò)張、結(jié)締組織增生和脂肪堆積。
　　 2.實(shí)驗(yàn)組術(shù)后動(dòng)物剛果紅染色切片的光鏡觀察提示，胰腺小葉組織間隙明顯增寬，胰島表現(xiàn)為朱紅色剛果紅著色現(xiàn)象。
　　 結(jié)論：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物胰組織結(jié)構(gòu)的形態(tài)學(xué)變化提示，胸導(dǎo)管結(jié)扎可導(dǎo)致胰淋巴引流障礙，引起胰淋巴管擴(kuò)張、結(jié)締組織間隙增寬、脂肪堆積以及胰淀肽沉積等。采用腹部結(jié)扎大鼠胸導(dǎo)管的手術(shù)方法，可以建立胰淋巴瘀滯的動(dòng)物模型，為進(jìn)一步探討實(shí)驗(yàn)性淋巴瘀滯

7、對(duì)胰組織細(xì)微和超微結(jié)構(gòu)、以及對(duì)內(nèi)分泌和代謝的影響奠定了基礎(chǔ)。
　　 第二部分結(jié)扎大鼠胸導(dǎo)管誘發(fā)胰組織結(jié)構(gòu)變化和胰淀肽沉積的形態(tài)學(xué)觀察
　　 目的：胰淀肽是由37個(gè)氨基酸組成的多肽，屬于胰島B細(xì)胞的正常分泌產(chǎn)物，并與胰島素共同貯存于B細(xì)胞的分泌顆粒內(nèi)，胰淀肽沉積是2型糖尿病典型的早期病理特征，并隨年齡的增長(zhǎng)而增多。通過(guò)腹部結(jié)扎大鼠胸導(dǎo)管，建立胰淋巴瘀滯動(dòng)物模型，觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物胰組織結(jié)構(gòu)變化和胰淀肽沉積情況，探討淋巴瘀滯對(duì)胰組

8、織細(xì)微和超微結(jié)構(gòu)的影響。
　　 方法：10月齡大鼠20只，隨機(jī)分為兩組，實(shí)驗(yàn)（手術(shù)）組和對(duì)照（假性手術(shù)）組；造模后6個(gè)月取材，部分胰組織做石蠟包埋切片，HE和剛果紅染色；部分組織切片做免疫組織化學(xué)染色和光鏡觀察。
　　 結(jié)果：
　　 1.實(shí)驗(yàn)組大鼠胰組織切片HE染色光鏡觀察顯示，胰腺小葉間隙顯著增寬，出現(xiàn)明顯的淋巴管擴(kuò)張、結(jié)締組織增生和脂肪堆積，胰島明顯可見(jiàn)呈淡染。
　　 2.術(shù)后動(dòng)物剛果紅染色切片的光鏡

9、觀察提示，胰腺小葉組織間隙明顯增寬，胰島表現(xiàn)為朱紅色剛果紅著色現(xiàn)象。
　　 3.胰淀肽免疫組織化學(xué)染色切片的光鏡觀察表明，在術(shù)后動(dòng)物的胰島及其周?chē)尸F(xiàn)胰淀肽免疫反應(yīng)強(qiáng)陽(yáng)性棕褐色著色反應(yīng)。
　　 結(jié)論：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物胰組織結(jié)構(gòu)的形態(tài)學(xué)變化提示，胸導(dǎo)管結(jié)扎可導(dǎo)致胰淋巴引流障礙，引起胰淋巴管擴(kuò)張、結(jié)締組織間隙增寬、脂肪堆積以及胰淀肽沉積等，結(jié)扎大鼠胸導(dǎo)管所致的結(jié)構(gòu)變化順序?yàn)橹咀冊(cè)谙?，淀粉樣變?cè)诤?，這些結(jié)構(gòu)變化會(huì)進(jìn)一步影響胰島的內(nèi)

10、分泌功能。
　　 第三部分結(jié)扎大鼠胸導(dǎo)管對(duì)胰組織結(jié)構(gòu)變化及胰島激素和糖代謝的影響
　　 目的：在生理情況下，胰島素由B細(xì)胞分泌入組織間隙后，可以進(jìn)入胰島周?chē)牧馨凸?，通過(guò)淋巴進(jìn)行轉(zhuǎn)運(yùn)，胰腺的淋巴系統(tǒng)，是胰島素正常轉(zhuǎn)運(yùn)的一條重要途徑。但是，如果這條途徑被阻斷，會(huì)不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的糖代謝產(chǎn)生影響?目前，尚未見(jiàn)相關(guān)的實(shí)驗(yàn)研究報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)采用腹部結(jié)扎大鼠胸導(dǎo)管，建立胰淋巴瘀滯動(dòng)物模型，觀察術(shù)后實(shí)驗(yàn)動(dòng)物胰組織結(jié)構(gòu)變化和胰淀肽沉積情況

11、，探討實(shí)驗(yàn)性淋巴瘀滯對(duì)大鼠胰島激素及糖代謝的影響。
　　 方法：30只10月齡SD大鼠隨機(jī)分為兩組，實(shí)驗(yàn)（手術(shù)）組15只和對(duì)照（假性手術(shù)）組15只；造模后6個(gè)月取材，部分胰腺標(biāo)本行石蠟包埋和組織切片，行常規(guī)HE和剛果紅染色后光鏡觀察；部分標(biāo)本做冰凍切片，進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色和光鏡觀察；部分標(biāo)本進(jìn)行透射電鏡樣品制備和觀察。并于胸導(dǎo)管結(jié)扎前后及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處死前，分別取靜脈血檢測(cè)空腹血糖、胰島素及C一肽，其中血糖做結(jié)扎前后的自身對(duì)照差異

12、檢驗(yàn)，胰島素和C-肽做實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的組間差異檢驗(yàn)。
　　 結(jié)果：
　　 1.胰淀肽免疫組織化學(xué)染色切片的光鏡觀察表明，在術(shù)后動(dòng)物的胰島及其周?chē)?，呈現(xiàn)胰淀肽免疫反應(yīng)強(qiáng)陽(yáng)性棕褐色著色反應(yīng)。
　　 2.術(shù)后動(dòng)物剛果紅染色切片的光鏡觀察提示，胰腺小葉組織間隙明顯增寬，胰島表現(xiàn)為朱紅色剛果紅著色現(xiàn)象。
　　 3.超薄切片透射電鏡觀察顯示，胰腺小葉間隙增寬，可見(jiàn)血管和擴(kuò)大的淋巴管；胰島細(xì)胞間隙增寬，細(xì)胞間隙內(nèi)可見(jiàn)大

13、量脂滴樣物質(zhì)和膠原原纖維樣結(jié)構(gòu)。此外，在增寬的胰組織間隙內(nèi)，胰島細(xì)胞間隙增寬，甚至擴(kuò)大形成管狀或池狀；除有明顯的脂類(lèi)物質(zhì)堆積，還?？梢?jiàn)到溢出血管外又難以被吸收的紅細(xì)胞；可見(jiàn)分泌顆粒大小和電子密度不同的胰島細(xì)胞，在胰島B細(xì)胞內(nèi)，有些分泌顆粒的暈環(huán)明顯增寬；有些胰島細(xì)胞的核，其核膜變得模糊不清，出現(xiàn)核染色質(zhì)邊集甚至核固縮，呈似細(xì)胞凋亡現(xiàn)象。
　　 4.胸導(dǎo)管結(jié)扎組大鼠術(shù)后血糖升高，與術(shù)前基礎(chǔ)值相比，差異具有顯著性；術(shù)后結(jié)扎組空腹血清

14、胰島素水平下降，與假手術(shù)對(duì)照組相比差異顯著，C.肽變化不明顯，組間差異不具有顯著性。
　　 結(jié)論：術(shù)后實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物的血糖水平明顯增高，排除手術(shù)過(guò)程的應(yīng)激影響，手術(shù)組血糖水平較術(shù)前明顯增高，推測(cè)結(jié)扎實(shí)驗(yàn)動(dòng)物胸導(dǎo)管可導(dǎo)致胰淋巴引流障礙，脂肪堆積以及胰淀肽沉積等，胰島細(xì)胞功能受損，部分胰島細(xì)胞凋亡，胰島激素轉(zhuǎn)運(yùn)受阻，血中胰島素濃度下降，并進(jìn)一步影響實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的糖代謝，導(dǎo)致血糖升高。
　　 第四部分結(jié)扎大鼠胸導(dǎo)管對(duì)脂質(zhì)代謝和胰組織結(jié)

15、構(gòu)的影響
　　 目的：探討胸導(dǎo)管結(jié)扎對(duì)脂質(zhì)代謝的影響，揭示淋巴回流障礙誘發(fā)胰組織的細(xì)微和超微結(jié)構(gòu)變化。
　　 方法：選用10月齡SD大鼠30只，隨機(jī)分為假手術(shù)對(duì)照（10只）組和結(jié)扎胸導(dǎo)管模型（20只）組，建立淋巴瘀滯動(dòng)物模型。術(shù)后6個(gè)月取靜脈血標(biāo)本進(jìn)行血脂檢測(cè)；部分胰組織標(biāo)本做石蠟包埋切片，HE和剛果紅染色光鏡觀察；部分胰組織進(jìn)行透射電鏡樣品制備和觀察。
　　 結(jié)果：
　　 1.與對(duì)照組相比，胸導(dǎo)管結(jié)扎模

16、型組大鼠游離脂肪酸濃度明顯下降，甘油三酯濃度也下降，然而，膽固醇濃度無(wú)顯著變化。
　　 2.常規(guī)HE和剛果紅染色切片光鏡觀察顯示，模型組大鼠的胰腺小葉間隙增寬，淋巴管擴(kuò)張，呈明顯的結(jié)締組織增生和脂肪堆積。
　　 3.超薄切片透射電鏡觀察顯示，模型組大鼠的胰島細(xì)胞間隙增寬，細(xì)胞間隙內(nèi)可見(jiàn)大量脂滴樣物質(zhì)、紅細(xì)胞和膠原原纖維樣結(jié)構(gòu)。
　　 結(jié)論：胸導(dǎo)管結(jié)扎可引起胰淋巴回流障礙和脂質(zhì)代謝紊亂，導(dǎo)致胰腺組織間隙增寬、脂肪堆

17、積、胰島細(xì)胞內(nèi)大量脂滴出現(xiàn)等，這些結(jié)構(gòu)變化可能影響胰的內(nèi)、外分泌功能。
　　 對(duì)大鼠胸導(dǎo)管起始部進(jìn)行選擇性有效結(jié)扎后，肉眼可見(jiàn)乳糜池明顯充盈，乳白色腸系膜淋巴管充分顯現(xiàn)，成功建立了淋巴回流阻滯的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型；術(shù)后半年取胰組織標(biāo)本光鏡觀察顯示，胰腺內(nèi)出現(xiàn)淋巴管擴(kuò)張、結(jié)締組織間隙增寬、脂肪堆積以及胰淀肽沉積等形態(tài)學(xué)變化；實(shí)驗(yàn)組胰組織透射電鏡樣品觀察提示胰島細(xì)胞間隙增寬，細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)大量脂滴，胰島B細(xì)胞分泌顆粒擴(kuò)大、暈環(huán)增寬等超微結(jié)構(gòu)改