胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤臨床回顧研究和胃神經(jīng)內(nèi)分泌癌的miRNA表達(dá)譜分析.pdf

1、第一部分胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤臨床病理特征及預(yù)后相關(guān)分析
　　目的：探討胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤（GEP-NENs）的臨床及病理特征，及其與預(yù)后的相關(guān)性，以期為本病的臨床診治工作提供理論基礎(chǔ)。
　　方法：收集并回顧性分析上海交通大學(xué)附屬第六人民醫(yī)院2003年5月至2013年5月總計(jì)93例GEP-NENs患者臨床病史資料和隨訪數(shù)據(jù)。分析患者臨床病理數(shù)據(jù)，并以總生存期為主要觀察終點(diǎn)，通過Kaplan-Meier生存曲線及 Log-ra

2、nk檢驗(yàn)，分析預(yù)后相關(guān)因素。
　　結(jié)果：
　　1.本研究中GEP-NENs患者男女比例1.4:1，平均年齡57.1歲，中位年齡53歲，發(fā)病高峰50-59歲。
　　2.原發(fā)灶位于結(jié)直腸（33.3％）、胰腺（25.8%）、胃（18.3%）、闌尾（12.9%）和小腸（9.7%）。非功能性GEP-NENs占84.9%，無特異臨床表現(xiàn)，多表現(xiàn)為腹部脹痛（63.4%）、消化道出血（28.0%）等，內(nèi)鏡及影像學(xué)檢查多見占位性病變。3

3、.成功完成病理復(fù)片的GEP-NENs患者中，神經(jīng)內(nèi)分泌瘤（NET）占73.8%、神經(jīng)內(nèi)分泌癌（NEC）占23.8%、混合性腺神經(jīng)內(nèi)分泌癌（MANEC）占2.4%；G1、G2和G3級(jí)腫瘤分別占52.4%、21.4%和26.2%。
　　4.免疫組化染色突觸素（Syn）陽性率89.5%，高于嗜鉻粒蛋白A（CgA）的陽性率70.9%，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.002）。
　　5.初診52.5%的GEP-NENs浸潤(rùn)肌層/漿膜層，

4、20.0%發(fā)生局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，14.0%發(fā)生同期遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。
　　6.91例（97.8%）患者接受手術(shù)治療，17例患者術(shù)后接受化療。
　　7.患者平均生存期（92.7±6.4）月。1年、3年和5年生存率分別為89.5%、74.3%和65.8%。
　　8.生存分析顯示腫瘤原發(fā)灶的分級(jí)、分類、浸潤(rùn)深度及區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移均與預(yù)后相關(guān)（P值依次為0.003、0.001、0.038、0.015和0.006）。
　　結(jié)

5、論：GEP-NENs臨床表現(xiàn)缺乏特異性，病理診斷是其主要的診斷方法。GEP-NENS總體預(yù)后相對(duì)較好；病理分級(jí)與分類、浸潤(rùn)深度、是否發(fā)生區(qū)域淋巴結(jié)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等與預(yù)后存在相關(guān)性。
　　第二部分胃神經(jīng)內(nèi)分泌癌相關(guān)miRNA表達(dá)譜分析
　　目的：篩選胃神經(jīng)內(nèi)分泌癌（GNEC）特征性差異 miRNA的表達(dá)譜，并對(duì)其靶基因和信號(hào)通路進(jìn)行分析，探尋 GNEC潛在生物標(biāo)志物，為后續(xù)分子機(jī)制研究奠定基礎(chǔ)，為該腫瘤臨床診治提供新思路。

6、　　方法：收集9對(duì)GNEC腫瘤組織及對(duì)應(yīng)正常組織的福爾馬林固定-石蠟包埋（FFPE）樣本并提取總RNA，其中3對(duì)GNEC腫瘤組織與相應(yīng)正常組織進(jìn)行miRNA基因芯片檢測(cè)，篩選出GNEC中顯著差異表達(dá)的miRNA，并對(duì)其作生物信息學(xué)分析。挑選部分差異表達(dá)miRNA，通過qRT-PCR進(jìn)行擴(kuò)大樣本量驗(yàn)證。
　　1. GNEC的FFPE樣本中抽提的總RNA，質(zhì)量良好符合后續(xù)實(shí)驗(yàn)要求。
　　2.使用 miRNA基因芯片篩選出了38個(gè)

7、顯著差異表達(dá)的miRNA，其中17個(gè)miRNA表達(dá)上調(diào)，21個(gè)miRNA表達(dá)下調(diào)（FCabs≥2.0且P<0.05）。生物信息學(xué)分析獲得大量靶基因和信號(hào)通路信息。
　　3.應(yīng)用qRT-PCR方法對(duì)挑選出的12個(gè)miRNA進(jìn)行擴(kuò)大樣本量驗(yàn)證，成功篩選出了7個(gè)差異表達(dá)的miRNA：其中 hsa-miR-196a-5p、hsa-miR-183-5p、hsa-miR-18b-5p表達(dá)顯著上調(diào)，hsa-miR-122-5p、hsa-miR-