白藜蘆醇對擬衰老模型小鼠脂代謝及血糖影響的實驗研究.pdf

1、隨著科學(xué)技術(shù)的進步、人們生活水平的提高及醫(yī)療衛(wèi)生事業(yè)的不斷發(fā)展，各年齡層死亡率（包括新生兒死亡率）和生育率逐漸降低，人類的平均壽命得到了明顯的延長，老年人在世界人口中的比例越來越高，人口老齡化問題已日益突顯。從1970年到2025年，60歲及60歲以上人口預(yù)計大約增加8.75億，即增加281％。
　　 步入老年期后，人的各種生理功能已經(jīng)開始減弱，循環(huán)、消化、呼吸、泌尿等各個系統(tǒng)的生理和代謝功能都逐漸降低?；A(chǔ)代謝率降低;蛋白質(zhì)合

2、成速度減慢;脂肪蓄積，血脂增加;糖耐量降低。而這些生理特點的直接后果是非傳染性慢病(Noncommunicable diseases，NCDs)的發(fā)病風(fēng)險增加。在人口老齡化的當今世界，衰老是非傳染性慢病發(fā)生的最直接最普遍的原因。據(jù)世界衛(wèi)生組織《2012世界健康統(tǒng)計數(shù)據(jù)》顯示，在NCDs死亡中心血管疾病占一半(48％)，其次是癌癥占21％，慢性呼吸系統(tǒng)疾病占12％，僅糖尿病一項單獨致NCDs死亡即占3.5％。2008年全球約有5700萬人

3、死亡，其中3600萬(63％)死于非傳染性慢病。
　　 目前延衰方法主要有藥物延緩衰老，有氧運動延緩衰老，食療延緩衰老，熱量限制延緩衰老，生物電磁場延緩衰老，心理調(diào)節(jié)延緩衰老等等，但均有一定的局限性。近來植物中的非營養(yǎng)成分即植物化學(xué)物的生物活性受到了普遍關(guān)注，此類非營養(yǎng)素物質(zhì)種類繁多，其中人體攝入水平較高的有茶多酚、槲皮素、番茄紅素、大豆異黃酮和大豆皂甙等。體內(nèi)、體外研究都已證明，由日常食物攝入植物化學(xué)物可預(yù)防癌癥、延緩衰老、預(yù)

4、防心血管疾病、調(diào)節(jié)免疫功能等方面發(fā)揮重要作用。
　　 白藜蘆醇(Resveratrol， RSV)是一類主要存在于葡萄、藜蘆、虎杖等植物中的多酚類化合物。是植物在惡劣環(huán)境下或遭到病原體侵害時，自身分泌的一種可抵御霉菌感染的抗毒素。有研究報道，RSV通過抑制磷酸二酯酶(phosphodiesterase， PDEs)，引起環(huán)單磷酸腺苷(cyclic adenosinemonophosphate， cAMP)水平增加，Epacl活性

5、增強，細胞內(nèi)Ca2+濃度上升，AMP激活性蛋白激酶(AMP-activated protein kinase，AMPK)激活。AMPK促進下游NAD+增加，進而導(dǎo)致沉默信息調(diào)節(jié)因子1(silent information regulator1，SIRT1)的激活，SIRT1發(fā)揮其去乙?；饔檬筆PARγ協(xié)同激活子1α(PPARγ coactivator1α，PGC-1α)激活，被激活的PGC-1α在體內(nèi)具有促進脂肪酸氧化、糖異生、線粒體

6、生物合成和線粒體呼吸等生理活性。我們推測RSV以這一通路模擬熱量限制，調(diào)節(jié)機體代謝平衡，最終起到延緩衰老的作用。
　　 根據(jù)前期預(yù)實驗結(jié)果，本實驗采用兩個劑量(45 mg/kg.bw.d和22.5mg/kg.bw.d)的RSV對D-gal誘導(dǎo)的擬衰老模型小鼠進行預(yù)防性干預(yù)，觀察其對脂代謝和血糖的影響，并初步探討可能的機制。
　　 材料和方法:
　　 一、動物的分組與喂養(yǎng)
　　 16周齡SPF級雄性昆明種小

7、鼠56只，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，按體重隨機分為基礎(chǔ)組、衰老組、RSVⅠ組（22.5mg/kg.bw.d）和RSVⅡ組(45mg/kg.bw.d)，每組14只?；A(chǔ)組每日頸背部皮下注射生理鹽水，其余三組注射200mg/kg.bw.d的D-gal溶液?；A(chǔ)組和衰老組每日給予0.5％的CMC溶液灌胃，RSVⅠ組和RSVⅡ組給予相應(yīng)濃度的RSV溶液灌胃。小鼠5-6只/籠飼養(yǎng)，溫度（20±2）℃，濕度40％-70％，自然光照，自由攝食飲水，每周稱量體

8、重2次。
　　 二、測定指標及方法
　　 在實驗進行到第16w末時，測定相應(yīng)的指標，分兩批進行，32只測定血糖、血脂、臟器指數(shù)、肝脂，24只灌流固定觀察肝臟病理學(xué)改變。
　　 （一）血糖、血脂
　　 16w干預(yù)期末，小鼠禁食12h后，乙醚麻醉下，摘眼球取血，離心取上清（即為血清），按照說明書要求測量以下指標:血糖(Glucose，GLU)、總膽固醇(Total cholesterol，TC)、甘油三酯（T

9、riglyceride，TG）、低密度脂蛋白膽固醇(Low-density lipoprotein-cholesterol，LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(High density lipoprotein-cholesterol, HDL-C)。
　　 （二）臟器指數(shù)
　　 解剖取肝臟、脾臟、胸腺，稱重，計算臟器重量與體重的比值;公式如下:臟器指數(shù)=臟器濕重(g)/體重(g)×1000。
　　 （三）肝脂

10、>　　 1、肝臟中TG、TC含量:氯仿—甲醇法
　　 用電子天平稱取100mg～150mg肝組織，加入3倍體積的甲醇進行勻漿，待勻漿無阻力后再加入6倍體積的氯仿，漩渦混勻器混勻制成10％的組織勻漿。室溫放置過夜，小心抽取下層有機溶劑層，按試劑盒說明測定有機溶劑層中TG、TC含量。
　　 2、肝臟游離脂肪酸（nonesterified fatty acids，NEFA）
　　 取100mg-150mg肝組織，用生

11、理鹽水制成10％組織勻漿，3000r/min離心15min，小心吸取上清液，按照試劑盒說明測定NEFA含量。
　　 （四）肝臟病理學(xué)
　　 小鼠乙醚麻醉下開腹，肉眼觀察肝臟有無明顯病變（顏色、形態(tài)、質(zhì)地、大小等），記錄肝臟外觀。灌流固定后分離肝臟，從肝右葉中部切取1.0×0.5×0.2cm大小的肝組織放入預(yù)先配置好的4％多聚甲醛液中，制成HE切片，在顯微鏡下觀察肝組織病理改變。
　　 三、數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計分析

12、>　　 用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，實驗結(jié)果用X±S表示，用方差分析比較各組間的統(tǒng)計學(xué)差異。檢驗水準α=0.05。
　　 結(jié)果:
　　 一、動物一般狀況及體重變化和臟器重量
　　 各組小鼠初始體重均數(shù)基本相等，16w末各組小鼠體重以衰老組最高，RSVⅡ組最低，衰老組與RSVⅡ組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。各組小鼠平均體重增量以衰老組最高，基礎(chǔ)組、RSVⅡ組與衰老組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05

13、)。衰老組胸腺重量最輕，且與其余三組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。脾臟重衰老組與RSVⅠ組偏低，基礎(chǔ)組和RSVⅡ組偏高，各組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。肝臟重量基礎(chǔ)組最高，RSVⅡ組最低，衰老組與RSVⅠ組居中，組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 二、肝臟病理改變
　　 1、大體改變
　　 16w末，基礎(chǔ)組和兩RSV組小鼠肝臟大體形態(tài)、顏色、質(zhì)地均正常，衰老組小鼠肝臟大體略呈黃褐色，肝實

14、質(zhì)萎縮脂肪充滿，故被膜緊張，邊緣飽滿，切面有油膩感。
　　 2、HE切片
　　 低倍鏡下衰老組小鼠肝細胞約有50％-75％發(fā)生了脂肪變性，已達到中度脂肪肝的程度，40倍鏡下可見肝細胞呈不同程度的脂肪變性、變性細胞體積增大，胞漿內(nèi)可見大量大小不一、邊界清楚的圓形空泡，并伴有不同程度的點狀、灶狀壞死和炎癥細胞浸潤?；A(chǔ)組、RSVⅠ組和RSVⅡ組肝細胞未見明顯異常。
　　 三、臟器指數(shù)
　　 肝體比以基礎(chǔ)組最高

15、，RSVⅡ組最低，組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。胸腺體重比和脾臟體重比均以衰老組最低，RSVⅡ組最高，其中胸腺體重比衰老組與其余各組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。脾臟體重比各組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 四、血脂、血糖水平
　　 各組小鼠血清TC、TG、LDL-C、HDL-C和GLU指標均以衰老組最高，血清TG衰老組與RSVⅡ組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，血清LDL-C兩劑量組與衰老組

16、差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。其余各指標組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　 五、肝脂含量
　　 16w末小鼠肝臟TC、TG、NEFA均以衰老組最高，RSVⅡ組最低，各組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（ P＞0.05）。
　　 結(jié)論:
　　 1、45 mg/kg.bw.d的RSV可減緩D-gal致擬衰老模型小鼠體重增加;
　　 2、兩個劑量的RSV均可減緩D-gal致擬衰老模型小鼠胸腺萎縮;