Myopodin蛋白在細(xì)胞和組織中表達(dá)和分布的研究.pdf

1、Myopodin是最新發(fā)現(xiàn)的synaptopodin蛋白家族的第二個成員。除了synaptopodin蛋白外，它和已知的蛋白沒有明顯的同源關(guān)系。Myopodin在氨基酸序列的N端及C端分別具有一個經(jīng)典的入核信號(NLS)，同時在氨基酸序列的410-563位之間還有一個肌動蛋白(actin)結(jié)合位點，可以直接與肌動蛋白相互作用，因此它是一種結(jié)構(gòu)蛋白。Myopodin也是一種細(xì)胞核質(zhì)蛋白，其在細(xì)胞核質(zhì)中的分布受分化和應(yīng)激的調(diào)控。 為

2、了進一步研究Myopodin蛋白的功能，我們首先制備其抗體。構(gòu)建了融合表達(dá)載體pGEX4T2-N-Myopodin。將構(gòu)建好的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌并誘導(dǎo)表達(dá)，把表達(dá)的N-Myopodin蛋白純化后做抗原，免疫兔子后，得到多克隆抗體。以得到的抗體通過免疫熒光染色，發(fā)現(xiàn)Myopodin在癌細(xì)胞HeLa和T24主要分布在細(xì)胞質(zhì)中，MG63在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中都有，而在正常的細(xì)胞NIH3T3和293T，Myopodin主要分布在細(xì)胞核中；通過免疫

3、組化，發(fā)現(xiàn)，在消化系統(tǒng)的食道、胃和腸的正常組織和癌變組織中，Myopodin蛋白表達(dá)的量幾乎沒有變化，而且在正常組織和癌變組織中，Myopodin蛋白主要都是分布在細(xì)胞質(zhì)中，細(xì)胞核中幾乎沒有，可能myopodin在癌細(xì)胞中分布有特異性，這是我們首次觀察到的myopodin在不同細(xì)胞系中的表達(dá)分布，并且myopodin在細(xì)胞核質(zhì)中的分布與癌癥的發(fā)生和發(fā)展有相關(guān)性。通過免疫印跡和免疫組化，發(fā)現(xiàn)，已經(jīng)發(fā)生癌變的肝組織中的Myopodin比癌旁