胸腺肽-β4在小鼠卵母細(xì)胞和早期胚胎中表達(dá)與分布規(guī)律的研究.pdf

1、胸腺肽-β4（thymosin-β4, Tb4）最初是從小牛胸腺組分Ⅴ中分離提純得到的一種分子量約為5k Da，由43個氨基酸殘基組成，親水性較強的小肽類物質(zhì)?，F(xiàn)代研究證實了Tb4是一種重要的G-actin活性隱蔽因子，在細(xì)胞微絲活動中有著調(diào)節(jié)G-actin活性的作用。Tb4普遍存在于脊椎動物的組織器官和部分無脊椎動物機體當(dāng)中，且具有高度的保守性。該分子還具有廣泛的生物學(xué)功能，其能夠作用于免疫調(diào)節(jié)、神經(jīng)發(fā)育、傷口愈合、炎癥反應(yīng)、血管發(fā)生

2、、細(xì)胞凋亡以及腫瘤發(fā)生和遷移等眾多的生理與病理活動。但針對該分子在哺乳動物卵母細(xì)胞成熟與早期胚胎發(fā)育相關(guān)領(lǐng)域的研究迄今還沒有系統(tǒng)的報道。
　　 本實驗以昆明白小鼠卵母細(xì)胞和早期胚胎作為主要實驗材料，應(yīng)用免疫組織化學(xué)、免疫熒光激光共聚焦和RT-PCR技術(shù)，對Tb4在相關(guān)發(fā)育過程中的表達(dá)與分布的進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究。因?qū)嶒炛邪l(fā)現(xiàn)Tb4在處于同細(xì)胞周期的早期胚胎細(xì)胞核、質(zhì)中具有定位表達(dá)有所差異，故本研究同時進(jìn)行了該分子在小鼠胚胎成纖維

3、細(xì)胞（MEFs）中的相關(guān)驗證實驗。
　　 本實驗獲得的結(jié)果表明：
　　 1.小鼠卵巢免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，伴隨卵泡發(fā)育，Tb4蛋白在卵母細(xì)胞中的表達(dá)量逐漸增高。該分子在初級卵泡的卵母細(xì)胞核、質(zhì)區(qū)域呈現(xiàn)較弱表達(dá)，而在卵泡發(fā)育后期的卵母細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)量明顯升高，同時在核膜處表達(dá)明顯，而在細(xì)胞核內(nèi)呈現(xiàn)較弱表達(dá)。同時Tb4蛋白在顆粒細(xì)胞中也有較弱程度的表達(dá)，在細(xì)胞核中也無分布。
　　 2.激光共聚焦結(jié)果表明，以染色質(zhì)構(gòu)型差

4、異劃分的三類發(fā)育潛力不同的GV期卵母細(xì)胞當(dāng)中，Tb4蛋白的定位表達(dá)有顯著差異。
　　 3.激光共聚焦結(jié)果揭示，Tb4蛋白在小鼠卵母細(xì)胞成熟和早期胚胎發(fā)育過程中，存在差異性的表達(dá)和定位變化。該分子的表達(dá)與定位規(guī)律與卵母細(xì)胞和早期胚胎所處的發(fā)育階段和細(xì)胞所處周期密切相關(guān)。
　　 4.激光共聚焦結(jié)果顯示在早期著床囊胚中，Tb4蛋白在著床側(cè)細(xì)胞的表達(dá)水平較高，揭示Tb4蛋白可能通過調(diào)節(jié)微絲解聚活動對胚胎著床活動產(chǎn)生重要的影響。<

5、br>　　 5.由卵母細(xì)胞成熟開始，直至早期著床囊胚的形成，Tb4蛋白的表達(dá)水平呈現(xiàn)上調(diào)性變化。尤其在桑椹胚、囊胚和早期著床囊胚當(dāng)中Tb4蛋白具有較高水平的表達(dá)，這與此階胚胎細(xì)胞增殖過程中的微絲活動特點相適應(yīng)。
　　 6.在早期胚胎體外培養(yǎng)的過程中，Tb4 mRNA從合子時期開始出現(xiàn)上調(diào)性表達(dá)，直到桑椹胚和囊胚，其表達(dá)量達(dá)到峰值。而在2-細(xì)胞胚胎中，該分子mRNA的表達(dá)量出現(xiàn)略高于臨近發(fā)育時期的表達(dá)高峰。
　　 7.本

6、實驗證實伴有強烈微絲聚合、解聚活動的細(xì)胞形態(tài)變化過程可以影響MEFs中Tb4蛋白的定位類型。而在MEFs增殖過程中，細(xì)胞周期因素也能夠?qū)b4蛋白定位類型產(chǎn)生顯著影響，具體為G1期細(xì)胞呈現(xiàn)高比例的細(xì)胞核強表達(dá)（NH）定位類型，而S期表現(xiàn)為高比例的細(xì)胞核弱表達(dá)（NL）定位類型。該實驗結(jié)果與胚胎實驗中出現(xiàn)的核、質(zhì)定位差異現(xiàn)象的規(guī)律是一致的。
　　 8.研究發(fā)現(xiàn)Tb4蛋白在MEFs中的定位類型還與細(xì)胞生長密度有關(guān)。在不同生長密度的ME

7、Fs集落中Tb4蛋白主要定位類型也有所差異，高密度區(qū)域細(xì)胞多呈現(xiàn)細(xì)胞核強表達(dá)（NH）定位類型，而低密度區(qū)域以細(xì)胞核弱表達(dá)（NL）定位類型細(xì)胞為主。
　　
　　 本實驗結(jié)論認(rèn)為Tb4主要通過執(zhí)行單體G-actin活性隱蔽的功能，對相關(guān)的微絲活動進(jìn)行生理性的調(diào)節(jié)，以保證細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)變化、生長和增殖活動的順利進(jìn)行。Tb4在小鼠卵母細(xì)胞成熟和早期胚胎發(fā)育過程中，存在差異性的表達(dá)與分布變化，能夠?qū)?xì)胞中的微絲活動和細(xì)胞增殖進(jìn)行