利用小鼠MI期卵母細(xì)胞獲取孤雌胚胎的研究.pdf

1、西南大學(xué)碩士學(xué)位論文利用小鼠MI期卵母細(xì)胞獲取孤雌胚胎的研究姓名：慈書峰申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：臨床獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：李躍民20080501兩南大學(xué)碩十學(xué)位論文摘要其中，15K’Wcm與20KV，cm場(chǎng)強(qiáng)的融合率顯著高于25KV／cm場(chǎng)強(qiáng)(1509％、1492％vs634％。p005)。5不同脈沖寬度對(duì)重構(gòu)卵融合的影響。通過核移植手段將MI期紡錘體移入去核MII期卵母細(xì)胞的透明帶下構(gòu)成重構(gòu)卵，選用O3mol／L甘露醇，含O1mmol／LM

2、gCl2、005mmol／LCaC12、O05％的BsA和O5mmol／LHEPES，作為電融合介質(zhì)，固定電場(chǎng)強(qiáng)度為2OⅪ陬：ITl，依次采用3種脈沖寬度(40s，80s，120s)對(duì)重構(gòu)卵進(jìn)行融合處理。其中脈沖寬度為40s和80“s時(shí)，融合率較高，但是兩者之間無顯著差異(1573％vs906％，p005)。6重構(gòu)卵的激活與培養(yǎng)。選用O3mol／L甘露醇，含01mmol／LMgCl2、005mmoⅥCaC12、O05％的BSA和05mm

3、ol／LHEPES，作為電融合介質(zhì)，采用電場(chǎng)強(qiáng)度20KV／cm，脈沖寬度40us，對(duì)重構(gòu)卵進(jìn)行融合處理。重構(gòu)卵的激活率為8629％，2細(xì)胞率為6178％，4—8細(xì)胞率為3288％，囊胚率為417％。結(jié)論：(1)經(jīng)CD處理的小鼠Ml期卵母細(xì)胞激活后能發(fā)育到囊胚階段，并且其發(fā)育能力明顯強(qiáng)于Mll期卵母細(xì)胞的孤雌胚。(2)乙醇、S疋12、A23187、電激活與A231876DMAP五種激活方法中，以A231876DMAP對(duì)經(jīng)CD處理的小鼠MI

4、期卵母細(xì)胞的激活效果最好，激活后孤雌胚發(fā)育到囊胚的比率也最高。(3)mCzB、KSOM、M16和mMl6四種培養(yǎng)液中，以mMl6對(duì)小鼠Ml期孤雌胚的發(fā)育最為有利。(4)小鼠Ml期紡錘體移植的重構(gòu)卵，在本實(shí)驗(yàn)室以15KV恐m～2OK№m之間的電場(chǎng)強(qiáng)度和40雌的脈沖寬度進(jìn)行融合的效果最好。(5)小鼠Ml期紡錘體與去核的MII期卵母細(xì)胞融合后經(jīng)激活處理，有一小部分能夠發(fā)育到囊胚階段。(6)利用CD處理小鼠MI期卵母細(xì)胞，抑制第一極體的排出，再