卵母細(xì)胞激活技術(shù)與胚胎干細(xì)胞分離、培養(yǎng).pdf

1、　　人胚胎干細(xì)胞因在再生醫(yī)學(xué)和人胚胎早期發(fā)育研究等方面潛在的應(yīng)用價(jià)值而成為近年來(lái)生命科學(xué)的研究熱點(diǎn),但是人胚胎干細(xì)胞研究面臨著嚴(yán)重的倫理學(xué)問(wèn)題和資源匱乏的限制。本課題圍繞卵母細(xì)胞激活和胚胎干細(xì)胞分離、培養(yǎng)這兩大主題,共進(jìn)行四部分實(shí)驗(yàn)研究,期望在避免或減少倫理學(xué)問(wèn)題的情況下,為人胚胎干細(xì)胞研究提供較為充足的胚胎來(lái)源,為成功建立人胚胎干細(xì)胞系奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。現(xiàn)分部敘述如下：
　　第一部分 小鼠卵母細(xì)胞孤雌激活的實(shí)驗(yàn)研究
　　目的：

2、探討化學(xué)激活劑對(duì)小鼠卵母細(xì)胞的孤雌激活作用以及分離培養(yǎng)孤雌生殖干細(xì)胞的可行性。方法：采用有重復(fù)的三因素三水平的正交設(shè)計(jì),觀察乙醇對(duì)小鼠卵母細(xì)胞的激活作用。乙醇聯(lián)合6-DMAP/嘌呤霉素對(duì)小鼠卵母細(xì)胞實(shí)施激活；采用鈣離子載體A23187(calcium ionophore A23187,A23187)聯(lián)合6-DMAP/嘌呤霉素對(duì)小鼠進(jìn)行激活處理。觀察各種化學(xué)激活劑對(duì)小鼠卵母細(xì)胞激活效果和孤雌胚胎的發(fā)育潛能。將孤雌囊胚接種于飼養(yǎng)層細(xì)胞上,觀

3、察孤雌胚胎在飼養(yǎng)層細(xì)胞上的生長(zhǎng)情況。結(jié)果：適于小鼠卵母細(xì)胞激活和孤雌胚發(fā)育的卵齡是9小時(shí)；乙醇濃度為7%；處理時(shí)間是5分鐘。但是隨著卵齡增大及乙醇濃度提高,卵母細(xì)胞的碎裂率明顯增加。乙醇聯(lián)合6-DMAP/嘌呤霉素后,孤雌胚胎發(fā)育潛能顯著提高。A23187能激活小鼠卵母細(xì)胞；與6-DMAP/嘌呤霉素聯(lián)合應(yīng)用能有效地提高孤雌胚胎的發(fā)育潛能。A23187聯(lián)合6-DMAP激活的卵母細(xì)胞能發(fā)育到囊胚階段,接種于飼養(yǎng)層后,孤雌囊胚能夠貼壁生長(zhǎng),分離