金福菇多糖TLH-G的結(jié)構(gòu)鑒定及其抗氧化活性研究.pdf

1、金福菇（Tricholoma lobayense），是一種味道鮮美的食用菌。本文的目的是篩選高抗氧化活性的金福菇多糖，進而從不同種金福菇子實體中篩選到一種新型的高抗氧化活性金福菇多糖TLH-G，并且對其物理化學(xué)性質(zhì)和結(jié)構(gòu)特征進行了深入研究，結(jié)合實驗室前期對金福菇多糖的構(gòu)效關(guān)系的研究，進一步分析了導(dǎo)致金福菇多糖高抗氧化活性的因素，結(jié)果如下:
　　1.不同品種金福菇菌種的篩選
　　在宏觀上采用菌種平板培養(yǎng)法分析菌種之間存在明顯的

2、拮抗作用，采用ITS序列分析技術(shù)分析了三種金福菇菌種之間的親緣關(guān)系，發(fā)現(xiàn)它們與Tricholomagiganteum(金福菇，登錄號:KF360838.1，KF360837.1，AF042591.1)相似度高達99％以上，通過對進化樹的構(gòu)建，確定它們?yōu)椴煌N的金福菇。經(jīng)多糖提取及HPLC分析，三種不同金福菇子實體多糖組分分布不一，具有品種多樣性，這與金福菇自身的遺傳因素密切相關(guān)，此外組分分布與實驗室前期研究的金福菇多糖組分分布一致。通過

3、前期大量的活性比較研究發(fā)現(xiàn)，高郵金福菇子實體小分子量的多糖組分具有較高的抗氧化活性。結(jié)果表明高郵金福菇子實體多糖具有優(yōu)越的抗氧化能力。所以選擇高郵金福菇子實體多糖進行下一步實驗。
　　2.金福菇多糖TLH-G的理化性質(zhì)及抗氧化活性研究
　　(1)采用閃式提取金福菇粗多糖，然后Savage除蛋白及超濾法獲得多糖TLH-G。經(jīng)HPLC-ELSD檢測證明TLH-G為純品，分子量分別為4.1×103Da，TLH-G的提取率為2.8％

4、。其總糖含量可以高達99％，糖醛酸含量為13.85％，從而導(dǎo)致好的水溶性，紫外光譜分析TLH-G中沒有蛋白和核酸的吸收峰，紅外檢測結(jié)果表明TLH-G具有多糖的典型特征吸收峰，并且只有吡喃環(huán)的存在。
　　(2)體外抗氧化結(jié)果表明:在清除DPPH及總抗氧化能力的兩個體系中，金福菇多糖TLH-G均表現(xiàn)出較高的抗氧化能力。關(guān)于DPPH自由基的清除能力，TLH-G的表現(xiàn)出的IC50值為430μg/mL;總抗氧化能力測定中TLH-G的IC50

5、值大于500μg/mL。以DPPH為考核指標(biāo)，研究比較9種常見真菌多糖的抗氧化活性，TLH-G具有最小的IC50值，結(jié)果說明其是一種天然高效的抗氧化劑。
　　3.對分離純化得到的金福菇多糖TLH-G進行物理化學(xué)性質(zhì)及結(jié)構(gòu)鑒定，結(jié)合TLH-3的抗氧化活性與結(jié)構(gòu)的關(guān)系，進一步深入剖析金福菇多糖的構(gòu)效關(guān)系。
　　(1)經(jīng)HPLC測定金福菇多糖TLH-G的分子量為4.1×103Da，再次證明了在金福菇多糖中，分子量越小，抗氧化能力越

6、強。同時，金福菇多糖TLH-G與LTH-3均具有較強的水溶性，也進一步說明金福菇多糖抗氧化活性與其水溶性密切相關(guān)。
　　(2)單糖組成結(jié)果表明:TLH-G中共7種單糖，其摩爾比為甘露糖∶鼠李糖∶阿拉伯糖∶葡萄糖醛酸∶半乳糖醛酸∶葡萄糖∶半乳糖=1.00∶0.56∶0.14∶0.33∶＜0.10∶14.13∶2.92。與TLH-3的單糖組成相比，分析發(fā)現(xiàn)葡萄糖和半乳糖的絕對含量以及一定量的鼠李糖是金福菇多糖TLH-3和TLH-G的高

7、抗氧化活性的重要因素。更重要的是，半乳糖和半乳糖醛酸含量直接關(guān)系到TLH-3和TLH-G活性的強弱，是金福菇多糖抗氧化活性的重要影響因素。
　　(3)甲基化GC-MS圖譜結(jié)果表明: TLH-G中主要是由→1)-Glcp-(6→構(gòu)成，另外→1)-Galp-（6→有占有一定比例，TLH-G的分支度分別為0.21，屬于小分支的多糖，而TLH-3分支度為0.74，是一種高度分支的多糖。故分支度是影響金福菇多糖TLH-G和TLH-3抗氧化活

8、性的又一因素，分支度越高的金福菇多糖，抗氧化活性越強。
　　(4)經(jīng)NMR檢測預(yù)測出TLH-G的結(jié)構(gòu)，主鏈主要是(1→6)-β-D-Glcp和(1→6)-β-D-Galp，分支點有一個:(1→3，6)-α-D-Manp。該結(jié)果與甲基化GC-MS結(jié)果基本相吻合。結(jié)果與TLH-3相比較，多元化的糖苷鍵類型是金福菇多糖高抗氧化活性的重要原因;這兩種多糖活性的差異進一步解釋了TLH-3中→3，6)-α-D-Glcp-(1→，→4)-α-D

9、-Glcp-（1→和→3）-β-D-Gap-(1→糖苷鍵對于維持多糖的高抗氧化活性具有重要作用;另外TLH-G中的(1→6)-β-D-Glc和特殊的結(jié)構(gòu)特征使得TLH-G的具有很強抗氧化活性。
　　綜上所述，從高郵菌種栽培所獲得的子實體中篩選分離到一種新型多糖TLH-G，研究發(fā)現(xiàn)具有非常好的抗氧化作用，并結(jié)合TLH-3的構(gòu)效關(guān)系研究，進一步解析了分子量，水溶性等物理化學(xué)性質(zhì)以及單糖組成，分支度，糖苷鍵類型等對于金福菇多糖抗氧化活性