歸芪多糖的分離純化、理化性質(zhì)、結(jié)構(gòu)鑒定與抗氧化活性研究.pdf

1、當(dāng)歸是我國傳統(tǒng)草本植物，作為臨床常用藥而被廣泛使用，其多糖為主要藥理成分之一，現(xiàn)代藥理學(xué)研究證明該多糖具有補(bǔ)血、抗腫瘤，抗輻射，免疫調(diào)節(jié)，抗氧化及治療胃潰瘍等作用。黃芪作為我國傳統(tǒng)中藥材已被使用超過2000年，在我國分布地域較廣，其中黃芪多糖是最主要的有效成分，并表現(xiàn)出良好的免疫增強(qiáng)功能、抗腫瘤、抗流感、防衰老及抗輻射等作用。
　　歸芪多糖(AAP)是依據(jù)古驗方“當(dāng)歸補(bǔ)血湯”，將當(dāng)歸和黃芪以特定比例(1∶5)混合水煎提取出的多糖。

2、歸芪多糖在前期研究結(jié)果中雖呈現(xiàn)出廣泛的藥理活性，但一方面這些歸芪多糖并未經(jīng)過系統(tǒng)的分離純化，含量較低、雜質(zhì)較多，且理化性質(zhì)和結(jié)構(gòu)不明，不能為其藥理機(jī)制的研究提供數(shù)據(jù)保障；另一方面，截止到目前為止，有關(guān)這方面的研究仍未見報道。
　　基于此，本研究以當(dāng)歸和黃芪為原料，優(yōu)化歸芪多糖的提取工藝與脫蛋白工藝，純化粗歸芪多糖并研究其理化性質(zhì)、結(jié)構(gòu)特征及抗氧化活性，為進(jìn)一步開發(fā)利用歸芪多糖奠定基礎(chǔ)。
　　(1)以當(dāng)歸、黃芪為原料，優(yōu)化酶輔

3、助提取歸芪多糖粗品的提取工藝。以多糖含量與提取率為評價指標(biāo)，在單因素試驗基礎(chǔ)上，通過正交試驗得出酶輔助提取歸芪多糖粗品的最佳工藝。結(jié)果顯示：纖維素酶輔助提取歸芪多糖粗品的最優(yōu)工藝條件為A1B3C3D3，即在酶底比為0.03％，酶解溫度為55℃，酶解時間為180min，酶解 pH為5.5時，多糖含量和提取率最高，分別為63.02%和11.90%。
　　(2)以歸芪多糖粗品為原料，研究最佳脫蛋白工藝，得到粗歸芪多糖(AAP)。采用Se

4、vag法、三氯乙酸法(TCA)、酶解法三種方法對歸芪多糖粗品進(jìn)行脫蛋白研究，比較其效果。結(jié)果表明，三種脫蛋白方法中，酶解法脫蛋白效果最佳。響應(yīng)面法確定酶解法脫蛋白的最佳工藝參數(shù)為：酶反應(yīng)溫度為60℃，pH值6.0，酶量5000U/g時，蛋白去除率最高，可達(dá)80.4%，多糖損失率為最低，僅為6.4%。
　　(3)粗歸芪多糖(AAP)經(jīng) DEAE-52纖維素柱色譜，Sephadex G-100葡聚糖凝膠柱色譜純化后，得到歸芪多糖純品

5、AAP-2A。通過物理、化學(xué)、光譜等方法對純化后歸芪多糖的理化性質(zhì)和結(jié)構(gòu)進(jìn)行初步分析。結(jié)果顯示：AAP-2A為中性多糖，其總糖含量為98.98%，相對分子量大于6.68×105 Dol，絕對分子質(zhì)量為2.252×106 Dol，構(gòu)象呈無規(guī)則線團(tuán)狀，多糖摩爾質(zhì)量分布范圍較集中，分子具有單分散性，即表明大小較均一。此多糖不含蛋白和核酸，在紅外吸收光譜中呈現(xiàn)出明顯的多糖特征吸收，AAP-2A由鼠李糖，半乳糖，阿拉伯糖，葡萄糖組成，其摩爾比為：

6、1∶2.13∶3.22∶6.18，主鏈骨架由1,3-α-L-鼠李糖，1,3-β-D-半乳糖，1,3、1,5、1,3,5-α-L-阿拉伯糖和1,4、1,4,6-α-D-葡萄糖構(gòu)成，側(cè)鏈分支由1位連接的α-D-葡萄糖組成，側(cè)鏈分支點位于阿拉伯糖的3位和葡萄糖的4位，說明 AAP-2A是一種新的中性雜多糖。
　　(4)從清除羥自由基(·OH)、DPPH自由基(·DPPH)和還原力的角度出發(fā)，研究并比較粗歸芪多糖(AAP)與純化后歸芪多糖