烏龍茶多糖理化性質(zhì)及抗氧化、降血糖活性研究.pdf

1、近二十年來，茶多糖因其多種生理功效而備受關(guān)注，特別是抗氧化活性和降血糖作用。本論文以國內(nèi)市場(chǎng)上三種發(fā)酵程度不同的烏龍茶（安溪鐵觀音、鳳凰單樅、武夷大紅袍）為原料，提取烏龍茶粗多糖，比較分析其理化性質(zhì)和體外抗氧化、降血糖生理活性。之后，根據(jù)其生理活性，篩選出活性高的大紅袍茶多糖進(jìn)行體內(nèi)抗氧化，降血糖研究，并探討降血糖機(jī)理。同時(shí)，分離純化大紅袍茶多糖，研究分離產(chǎn)物的分子結(jié)構(gòu)和化學(xué)成分，體內(nèi)體外生理活性，初步探討構(gòu)效關(guān)系。實(shí)驗(yàn)結(jié)論如下:

2、>　　1.以安溪鐵觀音、鳳凰單樅、武夷大紅袍為原料提取烏龍茶多糖，分別命名為TTPS、FTPS和DTPS其中DTPS得率最高，為1.84％，是得率最低的TTPS(0.83％)2倍以上。結(jié)合化學(xué)成分分析和紅外圖譜，表明這三種茶多糖是一類水溶性的酸性糖蛋白，主要有糖醛酸、中性糖和蛋白質(zhì)三類物質(zhì)構(gòu)成，三者含量達(dá)70％以上，其中糖醛酸含量最高，中性糖其次，蛋白質(zhì)最低。三者的蛋白質(zhì)含量呈現(xiàn)極顯著差異(p＜0.05)，并隨發(fā)酵程度的加深而增加，其中

3、DTPS的含量最高(9.30％)，TTPS則最低(5.57％)。氣相色譜GC分析三種烏龍茶多糖的單糖組分及摩爾比，發(fā)現(xiàn)它們都含有L-鼠李糖，D-巖藻糖，L-阿拉伯糖，D-木糖，D-甘露糖，D-葡萄糖，D-半乳糖這7種單糖，但摩爾比不同。凝膠色譜層析法檢測(cè)這三種烏龍茶多糖的分子量，發(fā)現(xiàn)其分子量較大，達(dá)到104～106數(shù)量級(jí)。
　　通過對(duì)這三種烏龍茶多糖的體外生理活性研究表明，DTPS的抗氧化活性及對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制作用最好，F(xiàn)TP

4、S其次，TTPS最弱，且與蛋白質(zhì)含量呈顯著正相關(guān)(r＞0.95)。而這可能與烏龍茶的發(fā)酵程度有關(guān)，發(fā)酵程度越大，其生理活性就越好。因?yàn)榘l(fā)酵程度會(huì)顯著影響茶多糖的化學(xué)組成（如蛋白質(zhì)含量），分子量，分子間相互作用及構(gòu)象，從而影響茶多糖的生理活性。
　　2.根據(jù)上一章試驗(yàn)結(jié)果，篩選出活性高的大紅袍茶多糖DTPS進(jìn)一步體內(nèi)活性研究。DTPS對(duì)四氧嘧啶誘導(dǎo)的糖尿病小鼠餐后血糖、空腹血糖、“三多一少”糖尿病癥狀、胰腺組織的影響研究表明，DTP

5、S能緩解糖尿病小鼠餐后血糖升高速度和幅度，縮短高血糖作用時(shí)間;緩解改善糖尿病“三多一少”癥狀;減輕四氧嘧啶誘導(dǎo)小鼠胰島損傷的作用，增加胰島數(shù)目，增大胰島面積;降低空腹血糖，且最佳作用時(shí)效為第2周。體內(nèi)抗氧化活性研究表明，DTPS灌胃4周后，DTPS-40組小鼠血清和肝臟組織中的MDA含量都顯著下降， SOD和GSH-Px抗氧化酶活性顯著上升。
　　綜合評(píng)價(jià)DTPS體內(nèi)體外抗氧化、降血糖作用表明，大紅袍茶多糖是一種有效的抗氧化劑，能

6、通過直接清除自由基或提高體內(nèi)抗氧化酶活性，抑制機(jī)體脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，緩解自由基對(duì)細(xì)胞的損傷作用;DTPS對(duì)糖尿病有一定防治作用，其作用機(jī)制可能是:(1)通過抑制α-葡糖糖甘酶活性，抑制葡萄糖在小腸的吸收，降低餐后血糖;(2)緩解糖尿病機(jī)體胰島數(shù)目減少，胰島面積減小的癥狀，改善胰島功能，提高機(jī)體胰島素的供給;(3)通過抗氧化作用，減輕自由基對(duì)β細(xì)胞的損傷。
　　3.大紅袍茶多糖DTPS經(jīng)DEAE-52纖維素柱層析洗脫分離后得到4組分，

7、分別為DTPS-0，DTPS-1，DTPS-2和DTPS-3，其中0.2 mol/L NaCI洗脫的DTPS-2組分得率最高，為31.9％。洗脫分離后，4組分的蛋白質(zhì)含量急劇下降至0.21％-0.83％，以糖醛酸和中性糖含量為主。HPLC檢測(cè)4組分的單糖成分表明，4組分都含有L-鼠李糖，D-甘露糖，D-葡萄糖，D-半乳糖，L-阿拉伯糖，木糖和半乳糖醛酸這7種單糖，但摩爾比不同。
　　紅外圖譜，掃描電鏡和原子力顯微鏡分析4組分的結(jié)構(gòu)

8、表明，4組分子結(jié)構(gòu)中都具有多糖類物質(zhì)和蛋白質(zhì)的特征吸收峰，DTPS-0為含有呋喃環(huán)的糖蛋白復(fù)合物，DTPS-1、DTPS-2和DTPS-3則是含有吡喃糖的糖蛋白復(fù)合物;這些糖蛋白是由多個(gè)糖鏈相互締合成直徑為50-100nm的多糖分子，多個(gè)多糖分子相互纏繞成直徑500 nm左右的多糖顆粒，多糖顆粒相互聚合呈多層次片狀、無規(guī)線團(tuán)狀、串珠狀等多種立體結(jié)構(gòu)的復(fù)合物，且茶多糖中糖醛酸和蛋白含量越高，其空間結(jié)構(gòu)就越復(fù)雜。
　　體外分析4組分的