上海市部分醫(yī)院致瀉性大腸桿菌和彎曲菌臨床分離株的耐藥性與分子分型.pdf

1、致瀉性大腸桿菌(diarrheagenic Escherichia coli，DEC)和彎曲菌(Campylobacter spp.)均為重要的食源性致病菌，它們廣泛存在于自然界，可造成急性腸道感染和嚴重腹瀉，是食品安全隱患。了解它們的流行特征、致病性和抗生素耐藥特征對預防和控制大腸桿菌和彎曲菌感染具有重要意義。本課題研究了上海市致瀉大腸桿菌和彎曲菌的耐藥性、毒力基因和分子流行病學特征，并對多重耐藥彎曲菌的耐藥分子機制做了初步探索。主要

2、研究結(jié)果如下：
　　1、致瀉性大腸桿菌的毒力基因和耐藥特征
　　致瀉性大腸桿菌是導致世界范圍細菌性腸炎的食源性致病菌。本論文利用上海市四家醫(yī)院從7204份腹瀉病人糞便樣本中分離出735株(10.2％)致瀉性大腸桿菌為材料開展大腸桿菌的毒力基因和抗生素耐藥性分析研究。其中有6122份糞便樣品來自中國人，分離出594株（9.7%）大腸桿菌，1082份來自居住在上海的外國人，分離出141株（13.1%）大腸桿菌，外國人的腹瀉糞便大

3、腸桿菌分離率高于中國人。來自5歲以下兒童的299株大腸桿菌以腸致病性大腸桿菌為主，而從19-60歲以上成人分離的365株大腸桿菌以產(chǎn)腸毒素大腸桿菌為主。腸致病性大腸桿菌（n=374,50.9%）和產(chǎn)腸毒素大腸桿菌（n=318,43.3%）為上海市致瀉性大腸桿菌的主要亞型，其中腸致病性大腸桿菌均攜帶 eae基因，為非典型性腸致病性大腸桿菌。318株產(chǎn)腸毒素大腸桿菌中攜帶腸毒素 estA，eltA和 estA-eltA的菌株分別有189株(

4、59.6%)、89株(27.8%)和40株(12.6%)。此外，鑒定出7株產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌，分別有5株和2株攜帶了毒力基因stx1和stx2。檢測了735株大腸桿菌分離株對16種臨床常用抗生素的耐藥情況，其中分離株對鏈霉素(90.7％)、氨芐西林(63.4％)、萘啶酸(61.1％)、磺胺異惡唑(49.1％)、四環(huán)素(41.2％)、甲氧芐氨嘧啶(35.6％)和復方新諾明(35.4％)的耐藥率較高，對阿莫西林/克拉維酸(27.2％)、頭孢

5、噻肟(24.5％)、頭孢吡肟(23.5％)、慶大霉素(16.7％)、頭孢他啶(12.4％)、氯霉素(10.6％)、環(huán)丙沙星(7.2％)和氧氟沙星(3.4％)也出現(xiàn)耐藥，無菌株對亞胺培南耐藥，多重耐藥菌株占比高達65.4%。
　　2、產(chǎn)腸毒素大腸桿菌的分子鑒定
　　產(chǎn)腸毒素大腸桿菌(enterotoxigenic Escherichia coli，ETEC)是導致發(fā)達國家“旅行者腹瀉”和發(fā)展中國家小兒腹瀉的重要致病菌。本論文對

6、分離自腹瀉病人的123株ETEC進行多位點序列分型(MLST)和脈沖場凝膠電泳(PFGE)分析以確定它們的遺傳相關(guān)性，并檢測了這些菌株攜帶的毒力基因和對臨床常用抗生素的耐藥性。MLST和PFGE共鑒定出29個序列型和63個PFGE型，兩種分型結(jié)果相關(guān)性較好。不同PFGE型的菌株所攜帶的腸毒素-定殖因子-染色體毒力因子的毒力基因譜有所不同。鑒定12株P(guān)FGE型SHNL0005、序列型ST2332且血清型 O128:H45的菌株與醫(yī)院新生兒

7、腹瀉有關(guān)，該克隆系為多重耐藥克隆系，可通過檢測毒力基因STh，CS21，clyA，eatA和CFA/I進行鑒定。此外，序列型ST182的9株菌為多重耐藥菌株，至少對6種抗生素耐藥。因此，序列型ST2332和ST182均為高風險克隆系。
　　3、腹瀉兒童彎曲菌分離株的流行和致病特征
　　彎曲菌是細菌性腸炎的重要致病菌，由于兒童飲食結(jié)構(gòu)與成人不同，他們是彎曲菌感染的一個特殊群體。本論文對五歲以下腹瀉兒童中分離的110株彎曲菌(包

8、括80株空腸彎曲菌和30株結(jié)腸彎曲菌)進行了檢測，以確定它們的遺傳相關(guān)性、耐藥性、攜帶的毒力基因以及對人結(jié)腸癌細胞Caco-2的侵襲力。MLST分型顯示，110株彎曲菌隸屬于16個克隆群下的77個序列型，其中CC464和CC574為空腸彎曲菌的主要克隆群，CC828為結(jié)腸彎曲菌的主要克隆群。彎曲菌對萘啶酸(88.2％)、環(huán)丙沙星(87.3％)和四環(huán)素(87.3％)的耐藥率很高，此外，對氨芐青霉素(30.9％)、慶大霉素(28.2％)、克

9、林霉素(21.8％)、紅霉素(21.8％)和氯霉素(8.2％)也有耐藥性。多重耐藥的空腸彎曲菌和結(jié)腸彎曲菌分別為32.5％和83.3％。其中，克隆群CC828的16株結(jié)腸彎曲菌對6種抗生素均有抗性：環(huán)丙沙星-克林霉素-紅霉素-慶大霉素-萘啶酸-四環(huán)素。大部分菌株攜帶了毒力基因cadF(100%)、ceuE(99.1%)、ciaB(98.2%)、flaA(98.2%)、ansB(97.3%)、cdtB(96.4%)、cdtC(96.4%)

10、和cdtA(94.6%)，而毒力基因fucP、virB11和ggt攜帶率相對較低，分別為31.8%、1.8%和1.8%。根據(jù)基因型和攜帶毒力基因不同，挑選了57株彎曲菌檢測對 Caco-2細胞的黏附和侵襲力。不同菌株的黏附力差別不大，但侵襲力水平存在較大差異，鑒定出12個強侵襲力的序列型，如ST21、ST3930和ST1953等。多重耐藥菌株和對宿主細胞強侵襲力的菌株是潛在的高風險菌株，威脅兒童健康。
　　4、多重耐藥彎曲菌分離株

11、的基因型特征
　　本論文檢測了2009-2014年從上海市腹瀉病人和禽肉中分離的548株彎曲菌(包含372株空腸彎曲菌和176株結(jié)腸彎曲菌)對環(huán)丙沙星、四環(huán)素、慶大霉素、紅霉素和克林霉素這五種臨床常用抗生素的耐藥性，分別篩選出對三種及三種以上抗生素耐藥的多重耐藥空腸彎曲菌32株(8.6%)和多重耐藥結(jié)腸彎曲菌119株(67.6%)。PFGE分別鑒定出26個和77個不同的PFGE型，其中結(jié)腸彎曲菌的77個PFGE型可分為7個主要簇(

12、簇A-G)，簇A(n=16)和G(n=16)為最主要克隆系，分別包含了11株和8株同一PFGE型的菌株，表明這些克隆系可能通過交叉感染在人群中傳播。鑒定了151株多重耐藥菌株的耐藥相關(guān)基因，gyrA基因86位密碼子突變的菌株達到150株(99.3%)；23s rRNA2075位堿基突變菌株56株(37.1%)；攜帶ermB，tet(O)，aadE基因和aadE-sat4-aphA基因簇的菌株分別有31株(20.5%)、148株(98%)