沒食子酸對二甲基亞硝銨致小鼠急性肝損傷的保護作用及其機制研究.pdf

1、目的：研究沒食子酸(Gallic acid，GA)對二甲基亞硝胺(Dimethy-lnitrosamine，DMN)所致急性肝損傷的保護作用并探索其對肝臟細胞代謝二相酶的誘導作用。
　　 方法：將50只健康雄性昆明種小鼠隨機分為5組：(A)正常對照組；(B)沒食子酸正常給藥組(100mg/kg);(C)二甲基亞硝銨肝損傷組；(D)低劑量沒食子酸預處理組(50mg/kg);(E)高劑量沒食子酸預處理組(100mg/kg)。各組小鼠

2、均連續(xù)灌胃三天，一天兩次，最后一次灌胃結(jié)束后12h，腹腔注射DMN25mg/kg。24h后摘除小鼠眼球采集血液，并留取肝臟標本。按照試劑盒說明書采用分光光度法分別測定血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Alanine Aminotransferase，ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(Aspartate Aminotransferase，AST)的活性；肝組織勻漿中超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase，SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(Glutath

3、ione Peroxidase，GSH-px)、谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶(Glutathione s-transferase，GST)的活性及丙二醛(Malondialdehyde，MDA)、還原型谷胱甘肽(Reduced Glutathione，GSH)的含量。光鏡下觀察肝臟石蠟切片的組織形態(tài)學變化，評定各組動物的病理損傷程度。采用免疫組織化學法、免疫印跡法檢測肝臟胞漿內(nèi)血紅素氧合酶-1(Heme Oxygenase-1，HO-1)、谷胱甘

4、肽巰基轉(zhuǎn)移酶(Glutathione s-transferase Alpha3，GSTA3)及胞核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子 Nrf2(NF-E2-related factor2)的蛋白表達。
　　 結(jié)果：
　　 1．DMN25mg/kg腹腔注射24h后可出現(xiàn)急性肝損傷，具體表現(xiàn)在：(1)血清中轉(zhuǎn)氨酶AST、ALT活性顯著升高(P＜0.01，P＜0.01)。(2)組織損傷程度明顯，鏡下觀察可見肝竇擴張，伴有大規(guī)模出血性壞死及炎癥細胞浸潤

5、。(3)肝勻漿中SOD、GSH-px活性降低(P＜0.01，P＜0.01)，提示肝臟抗氧化能力下降；MDA水平上升(P＜0.01)，GSH含量減少(P＜0.01)，表明DMN可導致脂質(zhì)過氧化及谷胱甘肽耗竭。
　　 2．GA預處理可對DMN引起的肝損傷產(chǎn)生保護作用，并呈現(xiàn)劑量依賴性，與損傷組相比：(1)血清中轉(zhuǎn)氨酶AST、ALT活性顯著下降(P＜0.01，P＜0.01)。(2)組織損傷程度減輕，鏡下觀察可見出血減少，炎癥細胞浸潤較

6、輕。(3)肝臟抗氧化能力升高，脂質(zhì)過氧化程度降低，表現(xiàn)為SOD、GSH-px活性增強(P＜0.05，P＜0.05)，MDA水平下降(P＜0.05)，GSH含量增加(P＜0.05)。(4)肝臟解毒能力提高，體現(xiàn)在GST活性水平提高(P＜0.01)。
　　 3．GA對正常小鼠無毒性反應(yīng)，表現(xiàn)在肝功水平無顯著性差異，組織形態(tài)正常，脂質(zhì)過氧化反應(yīng)未發(fā)生。而且GA可顯著提高小鼠的抗氧化能力，與正常對照組相比，GA正常給藥組SOD、GSH-

7、px活性增強(P＜0.01，P＜0.01)，還原型GSH含量增加(P＜0.01)，GST活性增強(P＜0.01)。
　　 4．蛋白表達情況：(1)與正常對照組相比，損傷組肝細胞核內(nèi)Nrf2表達增加，胞漿中HO-1、GSTA3表達增加，表明DMN經(jīng)肝臟代謝可產(chǎn)生大量活性氧，促進了Nrf2的核易位，進而上調(diào)了HO-1、GSTA3在胞漿中的表達，體現(xiàn)出機體在針對氧化應(yīng)激反應(yīng)時存在自我保護機制。(2)與損傷組相比，GA預處理組(100m

8、g/kg)的Nrf2、HO-1、GSTA3表達增加，為各組表達最高，表明GA可在活性氧基礎(chǔ)上進一步促進Nrf2的核易位和二相酶的表達，增強肝保護作用。(3)與正常對照組相比，正常給藥組(100mg/kg)Nrf2、HO-1、GSTA3的表達增加，說明在無病理損傷時，GA可提升肝臟的解毒能力。
　　 結(jié)論：
　　 1．正常情況下短期應(yīng)用沒食子酸可提高肝臟抗氧化能力及二相解毒能力。
　　 2．DMN具有顯著肝毒性，預