TGF-βRⅠ在糖尿病足創(chuàng)面肉芽組織中的表達(dá).pdf

1、目的：糖尿病足創(chuàng)面經(jīng)久不愈，修復(fù)機(jī)制復(fù)雜，目前尚不明確。轉(zhuǎn)化生長因子β1（transforming growth factor-beta1，TGF-β1）是多功能生物活性因子，在創(chuàng)面修復(fù)過程中發(fā)揮重要作用。已有研究證實(shí)，外源性TGF-β1可有效彌補(bǔ)糖尿病足創(chuàng)面中表達(dá)量減少的缺陷，加速創(chuàng)面的愈合。然而臨床試驗(yàn)性應(yīng)用TGF-β1的效果卻不理想。探究其原因，可能與其受體異常表達(dá)相關(guān)。本文通過分析轉(zhuǎn)化生長因子β受體Ⅰ（transforming

2、growth factor-beta receptor typeⅠ，TGF-βRⅠ）在糖尿病足創(chuàng)面肉芽組織和非糖尿病性創(chuàng)面肉芽組織中的表達(dá)差異，探討TGF-βRⅠ在糖尿病足創(chuàng)面修復(fù)過程中的作用，為糖尿病足創(chuàng)面修復(fù)機(jī)制和糖尿病足治療提供新思路。
　　1.糖尿病足組研究對(duì)象選自解放軍白求恩國際和平醫(yī)院內(nèi)分泌科于2015年1月至2016年6月間收治并符合入排標(biāo)準(zhǔn)的糖尿病足患者10例；非糖尿病組（對(duì)照組）研究對(duì)象選自同時(shí)間段于本院燒傷科住

3、院并符合入排標(biāo)準(zhǔn)的非糖尿病患者10例。分別收集兩組患者的年齡、性別、空腹血糖（fast blood glucose，F(xiàn)BG）、糖化血紅蛋白（glycosylated hemoglobin， HbA1C）、踝肱比（ankle-brachial index，ABI）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、肌酐等一般資料，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　方法：
　　2.兩組受試者均予以適當(dāng)清創(chuàng)，清創(chuàng)時(shí)間為10-15天，清創(chuàng)完畢后取各組創(chuàng)面肉芽組織。每份肉芽組織分為

4、三組，并以A、B、C標(biāo)記。
　　3.A組標(biāo)本放置于4％多聚甲醛固定液中，4℃保存，待兩組標(biāo)本收齊后行石蠟包埋。
　　4.部分經(jīng)石蠟包埋的A組標(biāo)本行切片及HE染色，光鏡下（400×）觀察兩組肉芽組織的形態(tài)及細(xì)胞組成；計(jì)數(shù)兩組肉芽組織HE染色切片中毛細(xì)血管數(shù)并行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　5.剩余石蠟包埋的A組標(biāo)本行切片及免疫組化，光鏡下（400×）觀察兩組肉芽組織切片中TGF-βRⅠ的表達(dá)情況。每份切片隨機(jī)選取10個(gè)染色陽性區(qū)域進(jìn)

5、行拍照，并進(jìn)行光密度分析，分析軟件為數(shù)字醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)（Image-pro-plus6.0）。TGF-βRⅠ的表達(dá)量用平均光密度值（optical density，OD）表示，半定量分析TGF-βRⅠ的表達(dá)情況。
　　6.B組標(biāo)本行蛋白印跡（Western blot）分析，Quantity One軟件分析兩組 TGF-βRⅠ的條帶灰度值。每個(gè)條帶中 TGF-βRⅠ的表達(dá)量用TGF-βRⅠ與GAPDH條帶灰度比值表示，定量分析TG

6、F-βRⅠ的蛋白表達(dá)情況。
　　7.C組標(biāo)本應(yīng)用Real-time PCR檢測TGF-βRⅠ的mRNA表達(dá)量。對(duì)照組第一號(hào)樣品為標(biāo)準(zhǔn)1，分別得到各組各樣本目的基因的Ct值，按照RQ=2-△△Ct，計(jì)算各組各樣本目的基因的RQ值，TGF-βRⅠ的mRNA表達(dá)量用RQ值表示，并對(duì)其行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　1.糖尿病足組與對(duì)照組年齡、性別、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、肌酐等一般資料無顯著性差異（P>0.05）；與對(duì)照組相比，糖尿病足

7、組FBG、HbA1C明顯升高，ABI降低（P<0.01）。
　　2.觀察兩組肉芽組織大體形態(tài)，可見糖尿病足組肉芽組織顏色晦暗，觸感韌，觸之不易出血；對(duì)照組肉芽組織顏色鮮紅，顆粒狀，觸之柔軟、濕潤、出血多。光鏡下觀察兩組肉芽組織HE染色切片，糖尿病足組肉芽組織中毛細(xì)血管網(wǎng)稀疏，成纖維細(xì)胞少，炎性細(xì)胞大量浸潤；對(duì)照組肉芽組織中毛細(xì)血管網(wǎng)密布，毛細(xì)血管網(wǎng)間可見大量增殖的成纖維細(xì)胞，炎性細(xì)胞浸潤少。對(duì)兩組肉芽組織HE切片中毛細(xì)血管數(shù)進(jìn)行統(tǒng)

8、計(jì)學(xué)分析，結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，糖尿病足組肉芽組織中毛細(xì)血管數(shù)量減少（P<0.01）。
　　3.光鏡下觀察兩組免疫組化染色切片，棕黃色或棕褐色顆粒即為染色陽性。可見糖尿病足組棕黃色染色顆粒少，著色淺；對(duì)照組棕黃色染色顆粒明顯增多，且著色深；用OD值表示TGF-βRⅠ的表達(dá)量，并行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，糖尿病足組TGF-βRⅠ的表達(dá)量降低（P<0.01）。
　　4.Western blot分析結(jié)果顯示：與對(duì)照組

9、相比，糖尿病足組TGF-βRⅠ的蛋白表達(dá)降低（P<0.01）。
　　5.Real-time PCR分析結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，糖尿病足組TGF-βRⅠ的mRNA表達(dá)降低（P<0.01）。
　　結(jié)論：
　　1.糖尿病足創(chuàng)面肉芽組織中毛細(xì)血管形成減少，肉芽組織老化嚴(yán)重。
　　2.糖尿病足創(chuàng)面肉芽組織中TGF-βRⅠ的蛋白表達(dá)量和基因表達(dá)量明顯降低。
　　3.糖尿病足創(chuàng)面肉芽組織中TGF-βRⅠ的表達(dá)量降低，可能