急性心肌梗死患者外周血Exosomes與心肌酶和病變嚴(yán)重程度的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：本研究通過對急性心肌梗死患者外周血來源的Exosomes的定量、定性分析，探討急性心肌梗死患者Exosomes與心肌酶學(xué)濃度、冠脈病變程度的相關(guān)性。進(jìn)一步了解外周血來源的Exosomes水平在心肌梗死發(fā)生發(fā)展中的作用及其對急性心肌梗死的預(yù)測以及應(yīng)用價值。
　　 方法：1、臨床病人的選擇：選擇2010-9～2011-5因胸痛可疑冠狀動脈疾病CAD在我院心內(nèi)科住院的93例患者進(jìn)行選擇性冠狀動脈造影。并將93例患者分為以下四組：

2、N組（24例，正常對照組），AMI組（23例，急性心肌梗死組），SA組（24例，穩(wěn)定性心絞痛組），UA組（22例，不穩(wěn)定心絞痛組）。2、外周血Exosomes的提?。河诓∪诵泄跔顒用}造影術(shù)過程中取動脈血40ml，F(xiàn)icoll離心得血漿，等量PBS稀釋，經(jīng)2000g*30min離心，將上清轉(zhuǎn)入到超離管中12,000×g,離心45min，4 ℃，之后轉(zhuǎn)移到另外一只超離管中11，000g*2h，4 ℃，1ml PBS重懸，補(bǔ)足PBS,經(jīng)0.2

3、2 μm濾器過濾，11，000g*70min離心后得到Exosomes，50μl-200μl PBS重懸，-80度冰箱保存以備下一步實(shí)驗(yàn)需要；3、BCA定量：取Exosomes樣本2ul，稀釋5倍，按照樣本與底物1:20的比例，在nanodrop上進(jìn)行BCA protein定量；4、流式分析：5ugExosomes與4 μm 直徑的醛／硫酸乳膠珠在室溫結(jié)合15 min，加PBS補(bǔ)充至1ml，室溫震蕩2 h，加入1mol／L甘氨酸30mi

4、n阻斷反應(yīng)，4000rpm離心3min，棄上清，PBS/0.5％ BSA洗滌3次,500ul PBS/0.5％BSA重懸，取出10ul結(jié)合Exosomes的磁珠分別加入PE-CD11c單克隆抗體、PE-CD81單克隆抗體、APC/cy7-MHC Ⅱ單克隆抗體、pacific bule-CD86單克隆抗體、PE-CD106單克隆抗體、PE-CD54單克隆抗體、FITC-CD3單克隆抗體及相應(yīng)的同型對照，避光孵育1h，PBS洗滌3次，上機(jī)檢

5、測[1]。5、記錄總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、糖化血紅蛋白（HbA1c)、CK、CK-MB、CK-MM、空腹血糖(FPG)，同時測量收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)、年齡、性別等相關(guān)指標(biāo)，詢問吸煙史、高血壓病史及糖尿病史。以冠脈病變支數(shù)和Gensini積分評價冠脈病變嚴(yán)重程度。6、采用SPSS18.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示。多組

6、之間比較采用方差分析，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。兩樣本均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，多樣本均數(shù)比較采用方差分析，各率及例數(shù)的比較用卡方檢驗(yàn)(χ2檢驗(yàn))；Exosomes與CK、Gensini積分等的單因素相關(guān)分析應(yīng)用Spearman秩相關(guān)。冠心病危險因素分析采用二分類Logistic回歸分析，回歸模型以Gensini積分為因變量，年齡、總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、白細(xì)胞計數(shù)、CD11C、CD86、

7、MHC-DR、CK、CK-MM、CK-MB等為自變量。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果：1、AMI與UA患者Exosomes的定量水平顯著高于正常對照組，AMI組Exosomes的表達(dá)量顯著高于SA組，患者Exosomes的表型分析顯示，AMI患者表達(dá)的CD11C、CD86、MHC-DR顯著高于正常組；2、AMI和UA組Exosomes水平與Gensini積分均高于SA組，提示其與冠脈病變斑塊的穩(wěn)定性有關(guān)。3、外周

8、血Exosomes水平與患者血清CK、CK-MB、CK-MM水平、WBC呈正相關(guān)。4、外周血Exosomes水平隨著Gensini積分增加而增大，呈正相關(guān)，可反映Exosomes還與冠狀動脈粥樣硬化病變的嚴(yán)重程度有關(guān)。
　　 結(jié)論：本研究表明外周血Exosomes與急性心肌梗死的發(fā)生及其嚴(yán)重程度相關(guān)。外周血Exosomes與血清CK、CK-MB、CK-MM水平、Gensini積分、WBC呈正相關(guān)。除了心肌酶水平與冠狀動脈造影外，