哮喘小鼠血清IL-17的變化及布地奈德對其干預(yù)作用的研究.pdf

1、目的:建立OVA致敏和激發(fā)的昆明小鼠哮喘模型，觀察肺泡灌洗液中細胞分類的變化，哮喘組肺組織的病理改變以及IL-17、IgE在哮喘組、布地奈德干預(yù)組及正常組小鼠血清中的變化，探討IL-17在哮喘發(fā)病機制中的作用以及糖皮質(zhì)激素的早期干預(yù)對哮喘病理變化的影響。
　　 方法:SPF級雌性昆明小鼠(大連醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心)，4～6周齡，體重18～20g，隨機分為3組，每組10只，A組為哮喘模型組，B組為布地奈德干預(yù)組，C組為正常對照組。

2、A、B組小鼠于實驗流程第0，7，14天給予腹腔注射OVA20μg+150μLAl(OH)3+50μLNS致敏；第27,28,29天,給予50μLOVA-NS(2g/L)滴鼻激發(fā)；第30～60天A組給予2％OVA生理鹽水霧化液40ml超聲霧化器霧化吸入，每天1次，每次持續(xù)約30min。B組首先給予布地奈德溶液50μL滴鼻干擾，1小時后再霧化，霧化吸入OVA溶液方法同A組，C組以生理鹽水代替致敏液、激發(fā)液及霧化液，方法同A組。在最后一次激發(fā)

3、24h后，摘取小鼠眼球放血后將其頸椎脫臼處死，三組小鼠行支氣管肺泡灌洗術(shù)。將回收的肺泡灌洗液涂片，固定，光學(xué)顯微鏡下進行細胞總數(shù)和分類的計數(shù)。細胞分類至少計數(shù)400個細胞，求出嗜酸性粒細胞所占百分比。三組小鼠開胸取出肺組織，置于10%的中性甲醛固定液中固定。常規(guī)取材、脫水、石蠟包埋、制備石蠟切片、HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察氣道組織形態(tài)、氣道上皮損傷、氣管及血管周圍嗜酸性粒細胞浸潤情況。外周血以3000r/min離心5min，將部分上清液

4、保存在-80℃冰箱用作IL-17A的測定，其余上清液保存于4℃測IgE。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)方法檢測三組小鼠血清IL-17A、IgE水平表達情況。
　　 結(jié)果：
　　 1．激發(fā)過程中哮喘組小鼠出現(xiàn)不同程度的前肢搔鼻，煩躁不安，之后俯伏不動，呼吸急促，二便失禁、皮毛失去光澤等癥狀；布地奈德干預(yù)組小鼠布地奈德干預(yù)前癥狀同哮喘組小鼠，干預(yù)后此類癥狀明顯減輕；而正常對照組小鼠無此類癥狀。
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5、．肺組織病理觀察結(jié)果：在高倍鏡下觀察，哮喘組小鼠氣管壁增厚，管腔變形，呼吸道可見上皮細胞脫落，黏液分泌明顯增多，平滑肌層增厚，黏膜下及管壁周圍炎性細胞明顯浸潤。布地奈德干預(yù)組可見上皮細胞偶有脫落，黏膜相對光滑完整，管壁增厚及炎癥細胞浸潤均明顯輕于哮喘組。正常對照組肺組織幾乎無上述病理改變。
　　 3．肺泡灌洗液中嗜酸性粒細胞百分比：肺泡灌洗液嗜酸性粒細胞百分比：哮喘組肺泡灌洗液嗜酸性粒細胞為15.503%±1.235%，干預(yù)組肺

6、泡灌洗液嗜酸性粒細胞百分率為4.628%±1.440%，正常對照組肺泡灌洗液嗜酸性粒細胞百分率為1.892%±1.029%，哮喘組肺泡灌洗液嗜酸性粒細胞百分率顯著高于干預(yù)組和正常組(P＜0.01)。
　　 4.IL-17:IL-17A在哮喘組小鼠血清中的濃度為10.714±2.287(ng/ml)，IL-17A在干預(yù)組小鼠血清中的濃度為5.807±1.653(ng/ml)，IL-17A在正常對照組小鼠血清中的濃度為0.3860±

7、0.1456(ng/ml)。IL-17A在哮喘組小鼠血清中的表達水平顯著增高，與干預(yù)、正常組相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。
　　 5.IgE:IgE在哮喘組小鼠血清中的濃度為6.939±0.119(ng/ml)，IgE在對照組小鼠血清中的濃度為5.538±0.24(ng/ml)，IgE在正常組小鼠血清中的濃度為5.443±0.249(ng/ml)。IgE在哮喘組小鼠血清中的表達水平顯著增高，與B、C組相比差異均有統(tǒng)計學(xué)

8、意義(P＜0.01)，干預(yù)組與正常組相比，IgE水平的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 6．哮喘組肺組織中IL-17A水平與血清中IgE水平、BALF中嗜酸性粒細胞比例呈正相關(guān)(分別為r=0.720，P=0.019；r=0.892，P=0.001)。
　　 結(jié)論：
　　 1．成功建立小鼠哮喘模型，其病理變化符合哮喘的病理生理改變。
　　 2．IL-17通過招募炎性分子在氣道聚集，引起氣道的慢性炎癥