七氟烷和異氟烷急性暴露對SD仔鼠海馬的神經(jīng)毒性作用及機制探討.pdf

1、目的：
　　 探討七氟烷和異氟烷急性暴露對SD仔鼠海馬的神經(jīng)毒性作用及機制。
　　 方法：
　　 建立吸入性麻醉藥急性暴露模型。將90只出生7d的雄性SD仔鼠隨機分組如下：對照組(C0組)、七氟烷組(S0組)和異氟烷組(I0組)。對照組大鼠在含60％氧的空氧混合氣中暴露6h，七氟烷組和異氟烷組大鼠在3.6％七氟烷和2.3％異氟烷中暴露6h。將暴露結(jié)束后存活的SD仔鼠分成以下三部分進(jìn)行取材檢測：透視電鏡觀察海馬神經(jīng)

2、元形態(tài)學(xué)的改變；TUNEL和活化Caspase-3片段的免疫組化技術(shù)(IHC)檢測神經(jīng)元凋亡；WesternBlotting檢測活化Caspase-3表達(dá)。另將210只出生7d的雄性SD仔鼠隨機分為對照組(C組)、七氟烷組(S組)、七氟烷＋蠅蕈醇組（S＋M組）、七氟烷＋荷包牡丹堿組（S＋B組）、異氟烷組（I組）、異氟烷＋蠅蕈醇組(I＋M組)和異氟烷＋荷包牡丹堿組(I＋B組)。在急性暴露前0.5hS＋M組、I＋M組和S＋B組、I＋B組分別

3、腹腔注射蠅蕈醇(Muscimol)和荷包牡丹堿(Bicuculline);激動劑和拮抗劑的給藥劑量分別是1mg/kg、8mg/kg;其余組別分別腹腔注射等體積的生理鹽水。急性暴露結(jié)束后待SD仔鼠完全復(fù)蘇后取出存活的SD仔鼠繼續(xù)母乳喂養(yǎng)直到21d斷奶，隨后從每組中取出6只SD大鼠進(jìn)行連續(xù)7天的Morris水迷宮實驗；行為學(xué)實驗結(jié)束后取材進(jìn)行GABA-A受體α1亞基和BDNF(腦源性神經(jīng)生長因子)的免疫組織化學(xué)實驗。同時各組其余的SD大鼠同

4、時進(jìn)行海馬取材，用于GABA-A受體α1亞基和BDNF(腦源性神經(jīng)生長因子)的RT-PCR實驗。
　　 結(jié)果：
　　 1、形態(tài)學(xué)變化
　　 透視電鏡見七氟烷(S0組)組和異氟烷組(I0組)大鼠海馬神經(jīng)元內(nèi)有殘缺不全的細(xì)胞核、腫脹的線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)；對照組(C0組)中的細(xì)胞核、線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)形態(tài)正常。
　　 2、細(xì)胞凋亡檢測
　　 IHC顯示：與正常對照組(C0組)相比，七氟烷組（S0組）和異氟烷組(

5、I0組)海馬神經(jīng)元凋亡顯著增加。TUNEL顯示：與正常對照組(C0組)神經(jīng)元凋亡數(shù)量（2±2）相比，七氟烷組（S0組）和異氟烷組(I0組)海馬神經(jīng)元凋亡數(shù)量顯著提高，分別為(13±2)和(22±5)，且異氟烷組與七氟烷組神經(jīng)元凋亡數(shù)相比有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。
　　 3、Caspase-3蛋白質(zhì)表達(dá)情況
　　 采用免疫蛋白印跡法(WesternBlotting)測定對照組(C0組)、七氟烷組(S0組)和異氟烷組(I

6、0組)樣品中活化Caspase-3蛋白質(zhì)含量，結(jié)果顯示七氟烷組和異氟烷組活化Caspase-3表達(dá)顯著增加(P＜0.05)，且在等效濃度下異氟烷組強于七氟烷組(P＜0.05)。
　　 4、行為學(xué)改變
　　 應(yīng)用Morris水迷宮方法檢測吸入性麻醉藥急性暴露后空白對照組(C組)、七氟烷組（S組）、七氟烷＋蠅蕈醇組（S＋M組）、七氟烷＋荷包牡丹堿組(S＋B組)、異氟烷組（Ⅰ組）、異氟烷＋蠅蕈醇組(Ⅰ＋M組)和異氟烷＋荷包牡丹

7、堿組(Ⅰ＋B組)SD大鼠的短期學(xué)習(xí)記憶和認(rèn)知功能，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：與C組相比，S組、Ⅰ組的潛伏期和潛伏距離顯著延長；與S組相比，S＋B組、S＋M組的潛伏期和潛伏距離無明顯變化；與Ⅰ組相比，Ⅰ＋B組、Ⅰ＋M組的潛伏期和潛伏距離無明顯變化。
　　 5、海馬BDNF和GABA-A受體α1亞基表達(dá)
　　 5.1免疫組織化學(xué)
　　 免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示：與C組相比，S組、Ⅰ組BDNF蛋白表達(dá)顯著降低；與S組相比，S＋B組、S＋M

8、組BDNF蛋白表達(dá)無明顯變化；與Ⅰ組相比，Ⅰ＋B組、Ⅰ＋M組BDNF蛋白表達(dá)無明顯變化；與C組相比，S組、Ⅰ組的GABA-A受體α1亞基蛋白表達(dá)無明顯變化；與S組相比，S＋B組、S＋M組的GABA-A受體α1亞基蛋白表達(dá)無明顯變化；與Ⅰ組相比，Ⅰ＋B組、Ⅰ＋M組的GABA-A受體α1亞基蛋白表達(dá)無明顯變化。
　　 5.2RT-PCR實驗
　　 RT-PCR實驗結(jié)果顯示：與C組相比，S組、Ⅰ組BDNF的mRNA表達(dá)顯著降低

9、；與S組相比，S＋B組、S＋M組BDNF的mRNA表達(dá)無明顯變化；與Ⅰ組相比，Ⅰ＋B組、Ⅰ＋M組BDNF的mRNA表達(dá)無明顯變化；與C組相比，S組、Ⅰ組的GABA-A受體α1亞基的mRNA表達(dá)無明顯變化；與S組相比，S＋B組、S＋M組的GABA-A受體α1亞基的mRNA表達(dá)無明顯變化；與Ⅰ組相比，Ⅰ＋B組、Ⅰ＋M組的GABA-A受體α1亞基的mRNA表達(dá)無明顯變化。
　　 結(jié)論：
　　 1、七氟烷和異氟烷急性暴露可致發(fā)育