人血漿中尿酸及嘌呤物質(zhì)的含量測(cè)定.pdf

1、尿酸是體內(nèi)嘌呤和核酸物質(zhì)的最終代謝產(chǎn)物，正常情況下血中尿酸濃度為20-60mg/L，當(dāng)尿酸濃度過高時(shí)，常常引起痛風(fēng)、腎結(jié)石、高血壓和冠心病等，因此監(jiān)測(cè)體內(nèi)尿酸的濃度是非常必要。目前臨床上測(cè)定尿酸的含量多采用尿酸酶法，但由于血漿中黃嘌呤、抗壞血酸和自由基的影響，使尿酸濃度測(cè)定結(jié)果誤差較大，本文建立了高效液相色譜法和液相色譜/同位素稀釋質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定人血漿中尿酸和嘌呤物質(zhì)的含量。
　　第一部分反相高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定人血漿六種嘌呤物

2、質(zhì)的含量
　　目的：建立同時(shí)測(cè)定血漿中6種嘌呤物質(zhì)的高效液相色譜法，比較正常人與白血病和肝硬化患者血漿中6種嘌呤的含量差異，考察它們與白血病(Leukemia)和肝硬化(liver cirrhosis)疾病的關(guān)系。
　　方法：色譜柱：Phenomenex C18(250 mm×4.6mm，5μm)；流動(dòng)相：50mmol/L醋酸銨(pH4.65)-甲醇(99:1，v/v)；流速：1mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm；柱溫：30

3、℃；進(jìn)樣量：100μL。
　　結(jié)果：尿酸、次黃嘌呤、鳥嘌呤、黃嘌呤、別嘌呤醇、腺嘌呤相鄰峰之間的分離度分別為：5.39、1.64、3.56、5.45、5.39。尿酸在0.5-20μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)r=0.9997；次黃嘌呤、腺嘌呤、黃嘌呤和別嘌呤醇在0.005-0.3μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)r分別為0.9998、0.9993、0.9999和0.9993；鳥嘌呤在0.015-0.3μg/mL

4、濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)r=0.9971。
　　結(jié)論：白血病和肝硬化患者血漿中的尿酸、次黃嘌呤和黃嘌呤含量明顯高于正常人，腺嘌呤和鳥嘌呤無明顯差異。
　　第二部分高效液相/同位素稀釋質(zhì)譜法測(cè)定血漿中的尿酸及嘌呤物質(zhì)
　　目的：建立液相色譜/同位素稀釋質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定人血漿中尿酸、黃嘌呤和別嘌呤醇含量的方法。
　　方法：以[1，3-15N2]尿酸和[1，3-15N2]黃嘌呤為內(nèi)標(biāo)，乙腈為血漿蛋白沉淀劑，用電噴

5、霧離子源的三重四極桿質(zhì)譜儀，選擇離子監(jiān)測(cè)(SIM)模式檢測(cè)目標(biāo)離子(負(fù)離子模式，[1，3-15N2]尿酸：M/Z169；尿酸M/Z：167；[1，3-15N2]黃嘌呤：153；黃嘌呤M/Z：151；別嘌呤醇M/Z：135)，用峰高內(nèi)標(biāo)法定量。
　　結(jié)果：尿酸在25-1028μmol/L濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)r=0.9989；黃嘌呤和別嘌呤醇在10-4.00μmol/L濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)r分別為0.9985、