柑橘園黃龍病分布及老果園病原菌和伴生菌分析.pdf

1、柑橘黃龍病(Citrus Huanglongbing，HLB)是柑橘生產(chǎn)上危害最大的病害，迄今為止沒有有效的治療藥劑和抗病品種，故柑橘園黃龍病的綜合防控至關(guān)重要，了解疫區(qū)柑橘園黃龍病感染情況、感病柑橘園的感病特征是對柑橘黃龍病進行有效防控的重要基礎(chǔ)。為明確柑橘黃龍病菌（Ca.L.asiaticus,CLas）在柑橘園中的分布情況，以及老果園感染黃龍病多年仍保持穩(wěn)定生產(chǎn)的原因，進一步為柑橘黃龍病的綜合防控提供有價值的參考數(shù)據(jù)，本研究以來自

2、江西贛州安遠縣新建果園、福建永春天馬柑橘場新建果園與猛虎柑橘場老果園的樣品為研究材料，采用Nested PCR法對柑橘植株進行黃龍病菌檢測并分析不同果園的HLB感病特征，獲得以下主要結(jié)果:
　　1.感病果園黃龍病菌分布情況調(diào)查:利用Nested PCR法對江西贛州安遠縣同一地點、相同管理模式的6個果園的柑橘植株進行柑橘黃龍病病原菌的檢測調(diào)查，結(jié)果表明:病原菌在果園中均有分布，不同果園感病程度不同，6個果園感病植株率介于27％-64

3、.5％之間;感病植株病原菌含量普遍較低，70％以上的感病植株感病等級為1（8個樣品中僅1到2個樣品為黃龍病陽性）;同一果園中，病原菌在果園不同位置（邊緣、中心）、植株不同方向（東、南、西、北）的分布比例明顯不同，差異較大。
　　2.黃龍病疫區(qū)蘆柑種植新模式對黃龍病防控效果的調(diào)查:將福建永春種植新模式果園——天馬柑橘場與江西贛州新建果園、福建永春老果園的HLB病情調(diào)查結(jié)果進行比較，結(jié)果表明:2016年4/5月的調(diào)查結(jié)果中，天馬柑橘場

4、的感病植株率為8.33％，明顯低于另外兩處果園的40％、71％;將感病植株進行清除后，2017年4月對天馬柑橘場進行第二次HLB調(diào)查，結(jié)果顯示感病植株率為零。說明新模式下，果園HLB病情受到了良好的控制。
　　3.對福建永春老果園感病多年但一直保持生產(chǎn)的原因進行調(diào)查研究:HLB調(diào)查結(jié)果顯示，三次調(diào)查中HLB株感病率皆在70％以上。對病、健植株的韌皮部樣品進行16S擴增子高通量測序，結(jié)果顯示:感病植株中CLas相對豐度達66％，OT

5、Us(Operational Taxonomic Units)聚類結(jié)果顯示感病植株中有62個特有OTUs，含有多種抗不同逆境的細菌;健康植株中有60個特有OTUs，含有多種具有生物降解功能或抗藥性的細菌。進一步采用T-A克隆法對高通量測序結(jié)果進行驗證，獲得的24條基因序列中有13條與高通量測序獲得的序列一致性達到95％以上，說明16S擴增子高通量測序結(jié)果與驗證結(jié)果是吻合的。
　　4.江西贛州、福建永春猛虎柑橘場黃龍病菌噬菌體差異分

6、析:對兩地柑橘黃龍病菌原噬菌體種類進行鑒定分析，原噬菌體SC1選取特異基因Hol，原噬菌體SC2選取特異基因Taa，通過T-A克隆法獲得的上述基因序列，進行進一步比較分析表明:江西贛州、福建永春兩地來源的柑橘黃龍病菌分離物中，Hol基因、Taa基因堿基序列無明顯差異，且與已報道的CLas株系中相對應(yīng)基因同源性達100％(基因登錄號:CP004005.1，CP019958.1，CP010804.1，KX879602.1)。證實福建、永春柑