異丁香酚體內(nèi)外抗炎作用研究.pdf

1、以炎癥表現(xiàn)為特點的這種反應(yīng)是自我抵御外部攻擊的一種獨特保護(hù)機(jī)制。當(dāng)外界刺激過強(qiáng)或機(jī)體自身免疫能力下降時，就會出現(xiàn)炎癥過度反應(yīng)，繼而增加多種疾病的發(fā)生率和死亡率，如慢阻肺、肝炎、癌癥。因此，如何有效地控制炎癥過度反應(yīng)所引起的機(jī)體損傷已成為人們研究的重點。巨噬細(xì)胞是一種具有吞噬、介入炎癥的免疫細(xì)胞，在炎性進(jìn)展過程中有著舉足輕重的地位。受到外界刺激時，許多炎性介質(zhì)能夠被巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，其中TNF-α和IL-6在炎性反應(yīng)中發(fā)揮著重要作用。NF-κ

2、B已被公認(rèn)為調(diào)控炎癥的首要機(jī)制， NF-κB有著廣泛的生物效應(yīng)，包括從參與免疫及應(yīng)激反應(yīng)到?jīng)Q定增殖、分化、腫瘤發(fā)生、細(xì)胞凋亡和組織重構(gòu)等細(xì)胞命運(yùn)。NF-κB在體內(nèi)被嚴(yán)格調(diào)控，一旦失控，就會引起多種疾病，包括癌癥、炎癥及免疫失調(diào)。
　　非甾體和甾體類的抗炎藥是臨床用于治療炎癥的中流砥柱。但這些藥物治療“治標(biāo)”而非“治本”，且副作用大，因而急切需要發(fā)展一類毒副作用小、療效好的藥物。近年來，天然化合物因其特有的生物學(xué)活性而逐漸在醫(yī)療領(lǐng)域

3、得到注意。
　　桉葉油、薄荷醇等是一種從植物、草藥或香料提取的具有芳香和揮發(fā)性的液體。異丁香酚是一種接近淡黃色的油狀液體，天然存在于肉豆蔻、肉桂和丁香中?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明其具有解熱鎮(zhèn)痛、抗炎、麻醉等藥效，又因為沒有太大的壞處，很少保留在體內(nèi)，所以一直被人們所青睞。近年來，一系列與異丁香酚相關(guān)的物質(zhì)的抗炎活性逐漸引發(fā)人們的注視。
　　因此，本文選取了4種揮發(fā)油進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證和純度測定，采用LPS誘導(dǎo)的方法構(gòu)建急性體外模型，采用

4、SRB法和LDH法測定各揮發(fā)油的細(xì)胞毒性作用，并選取無細(xì)胞毒性濃度范圍開展揮發(fā)油抗炎實驗;通過一氧化氮(NO)和細(xì)胞因子的測定，比較了4種揮發(fā)油的抗炎能力，最終選取異丁香酚為深入研究對象。
　　接著，對異丁香酚進(jìn)行進(jìn)一步考察。巨噬細(xì)胞吞入染料的多少因其吞噬能力的不同而有區(qū)別，中性紅的吞入可反映其吞噬能力的強(qiáng)弱;細(xì)胞上清中一氧化氮(NO)的變化可以通過nitrate reduction法測定;酶聯(lián)免疫吸附法測定IL-6、TNF-α、

5、PGE2的產(chǎn)生，RT-PCR法測定相關(guān)mRNA的表達(dá);western blot測IκBα的降解;免疫熒光法檢測NF-κB的核轉(zhuǎn)移。結(jié)果表明異丁香酚能夠抑制LPS誘導(dǎo)產(chǎn)生的炎癥介質(zhì)的釋放且成劑量依賴性，并且對促炎因子及其轉(zhuǎn)錄的抑制可能是通過調(diào)控NF-κB p65相關(guān)的通路來實現(xiàn)的。
　　最后，考察了異丁香酚的體內(nèi)抗炎能力。采用香煙煙霧提取物(CSE)腹腔注射的方法構(gòu)建了肺部炎癥模型，并通過高效液相的方法進(jìn)行了定量;分別從肺灌洗液中巨

6、噬細(xì)胞的吞噬能力、血清中細(xì)胞因子的變化、肺組織中細(xì)胞因子基因表達(dá)變化三部分考察了炎癥變化情況;通過HE染料染色直接觀察肺組織的改變;結(jié)果表明異丁香酚可以抑制CSE作用產(chǎn)生的吞噬能力、IL-6、TNF-α、IL-2的升高，并且能夠抑制它們mRNA的表達(dá);病理形態(tài)觀察表明異丁香酚能夠改善CSE誘導(dǎo)形成的肺部炎癥病理現(xiàn)象;免疫組化實驗證明異丁香酚可以阻礙NF-κB p65的核轉(zhuǎn)移。
　　綜上所述，本研究初步明確了異丁香酚的抗炎機(jī)制，它能