人參皂苷對K562細胞的增殖抑制及誘導分化作用.pdf

1、目的:
　　 細胞增殖失控、分化成熟受阻、正常的凋亡程序失調、導致異常分化細胞大量增殖是白血病細胞疾病的生物學特點。因此白血病的有效治療方法就是抑制細胞增殖、誘導異常分化的細胞向成熟或者較成熟細胞方向分化。人參是祖國傳統(tǒng)醫(yī)學的“補血”要藥,人參總皂苷(total saponins of panax ginseng,TSPG)是其主要藥理成分。目前從人參中提取的人參皂苷單體有30多種,其藥理效應和作用機制不盡相同。人參皂苷Re(g

2、ensingnoside Re)是人參皂苷的一類主要有效成分,質量分數(shù)約占人參總皂苷的30％,目前人參皂苷Re對白血病細胞的分化誘導作用尚未見報道。本課題以慢性粒細胞白血病細胞株K562為研究對象,觀察不同濃度TSPG和Re作用后,K562細胞的增殖和分化情況,探討TSPG和Re對白血病的作用,為更深入的機制研究奠定基礎。
　　 方法:
　　 1.以慢性粒細胞白血病細胞株K562為研究對象,觀察不同濃度TSPG對K562

3、細胞不同作用時間點的增殖抑制情況:采用MTT噻唑藍比色試驗測定不同濃度TSPG作用K562細胞不同時間點的抑制率;臺盼藍拒染活細胞計數(shù)不同濃度TSPG作用K562細胞不同時間點的細胞存活率。
　　 2.觀察不同濃度TSPG和Re誘導K562向紅系細胞分化情況:測定不同濃度TSPG和Re作用K562細胞48小時和/或者72小時后,K562細胞平均血紅蛋白含量。不同濃度TSPG和Re作用K562細胞不同時間后計數(shù)其聯(lián)苯胺染色陽性率。

4、
　　 3.流式細胞術檢測細胞表面標志物和凋亡率:400 mg/L的TSPG作用K562細胞48小時后檢測其凋亡率。90μmol/L的Re作用K562細胞24h,48h,72h后檢測細胞表面CD13、CD15、GPA。
　　 結果:
　　 1.TSPG對K562細胞的影響:MTT和臺盼藍計數(shù)顯示TSPG濃度在200 mg/L-800 mg/L范圍內對K562細胞增殖有抑制作用,并呈濃度和時間依賴性。聯(lián)苯胺染色提示

5、不同濃度TSPG作用K562細胞的陽性率與對照組比較無明顯差異;血紅蛋白測定結果顯示不同濃度TSPG作用。K562細胞的血紅蛋白含量與對照組相比有顯著差異(P＜0.05),但不同濃度TSPG組間并無差異。流式細胞術檢測結果顯示TSPG400mg/L組細胞凋亡率與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 2.Re對K562細胞的影響:人參皂苷Re90μmol/L可以誘導K562細胞向早期紅系細胞分化,表現(xiàn)為:K562細胞

6、形態(tài)學上可見細胞體積縮小,核直徑減小,胞漿豐富,核漿比例降低;Re在體外對K562細胞有誘導血紅蛋白生成的作用;細胞膜表面CD13陽性率增加。
　　 結論:
　　 1.TSPG濃度在200 mg/L-800 mg/L范圍內對K562細胞增殖有抑制作用,并呈濃度和時間依賴性。TSPG可誘導K562細胞分化。TSPG對K562細胞的增殖抑制作用可能與誘導K562細胞凋亡有關。
　　 2.人參皂苷Re90μmol/L能