青蒿CQ-189對人紅白血病細胞株（K562）增殖抑制及誘導(dǎo)分化的影響.pdf

1、目的：白血病是嚴重威脅人類生命健康的造血系統(tǒng)惡性腫瘤。迄今白血病的治療仍主要采用傳統(tǒng)的大劑量聯(lián)合化療，但此療法副作用大，復(fù)發(fā)率高，尤其對機體的免疫功能和骨髓造血功能有極大損傷。因而尋找特異性高，對機體毒副作用小的新型天然抗腫瘤藥，是當(dāng)今抗腫瘤藥物研究的熱門課題。 青蒿屬菊科植物，青蒿素是從青蒿葉中分離的抗瘧疾有效成份。研究證實：青蒿素不僅具有良好的抗瘧疾作用而且又有抗腫瘤等多方面的藥理作用。文獻報道青蒿素衍生物對多種惡性腫瘤包括

2、血液惡性腫瘤有選擇性抑制作用。迄今為止，尚未見青蒿素衍生物對白血病增殖抑制及誘導(dǎo)分化的研究報道。K562細胞是一種分化很低的人類髓系白血病細胞，具有向紅系、粒一單核或巨核系細胞分化的可能性，是研究白血病細胞增殖分化的理想模型。本研究以課題組分離純化的AACO．189抗腫瘤成分為對象，采用現(xiàn)代生物學(xué)技術(shù)，探討了其對K562細胞增殖、分化的影響，并初步比較了它對正常細胞的作用和相關(guān)毒性作用，旨在闡述從CQ一189具有抑制白血病的作用，為研究

3、天然抗腫瘤藥物提供理論與實驗依據(jù)。 方法：本實驗采用臺盼蘭拒染法、四甲基偶唑鹽(MTT)法和流式細胞術(shù)(FCM)，研究AACQ一189體外作用對K562細胞增殖的影響及其與細胞周期調(diào)控的關(guān)系；通過光鏡、電鏡觀察與圖像分析法，研究經(jīng)AACQ一189誘導(dǎo)后K562細胞形態(tài)學(xué)(包括胞核成熟情況、核漿比例、細胞直徑、細胞體積、細胞器及特殊物質(zhì)形成)的改變；細胞化學(xué)染色檢測細胞內(nèi)過氧化物酶(POX)及非特異性脂酶(Q—NAE)表達的變化。

4、采用造血祖細胞體外半固體培養(yǎng)技術(shù)，觀察AACQ一189對小鼠多向造血祖細胞(CFU-Mix)增殖分化的作用。通過臺盼蘭拒染法、四甲基偶唑鹽(MTT)法研究AACQ一189體外作用對人臍血單個核細胞、人胚胎神經(jīng)干細胞和人胚肺成纖維細胞增殖的影響。通過昆明小鼠的體內(nèi)藥理實驗，測定AACQ一189的半數(shù)致死量(LDso)，運用石蠟切片，H．E染色技術(shù)觀察AACQ一189對小鼠重要器官的損傷。 結(jié)果： l、AACQ-189對人紅

5、白血病細胞株(K562)增殖抑制及誘導(dǎo)分化的影響。 1．1、AACQ一189對正常小鼠CFU-Mix和K562細胞增殖有雙向調(diào)節(jié)作用：AACQ—189在一定濃度范圍內(nèi)(3．125-25．00mg／L)對體外培養(yǎng)的正常小鼠CFU-Mix無明顯影響；MTT法顯示：AACQ一189(3．125-25．00mg／L)對K562細胞的增殖有抑制作用，并隨著藥物濃度增加和時間的延長，其抑制作用逐漸增強。 1．2、AACQ一189可阻

6、止K562細胞進入細胞增殖周期：流式細胞術(shù)檢測顯示，AACQ一189(12．5-25．0mg／L)作用K562細胞2天可明顯減少處于增殖活躍期的細胞數(shù)，提示AACQ—189可阻止細胞進入增殖周期，從而抑制白血病細胞的增殖。 l3、AACQ．189可誘導(dǎo)K562細胞凋亡：流式細胞術(shù)檢測顯示AACQ一189(12．5-25．0mg／L)作用K562細胞2天可出現(xiàn)10-20％的凋亡率。電鏡下可見到凋亡小體。 1．4、AACQ一

7、189誘導(dǎo)K562細胞分化：①形態(tài)學(xué)觀察表明：經(jīng)AACQ一189誘導(dǎo)后，K562細胞體積增大，細胞核固縮，胞漿中見大量空泡，胞漿量減少，核膜不完整。 ②細胞化學(xué)檢測顯示：經(jīng)AACQ一189誘導(dǎo)后，K562細胞的血紅蛋白和過氧化物酶表達明顯增加。 2、AACQ-189對胚胎細胞增殖的影響。 AACQ一189在一定濃度范圍內(nèi)(3．125—12．5mg／L)對體外培養(yǎng)的人胚胎神經(jīng)干細胞和人胎肺成纖維細胞的增殖無顯著影響

8、。在25．0mg／L時對人胚胎神經(jīng)干細胞和人胎肺成纖維細胞有顯著的抑制作用。 3、AACQ-189對小鼠的毒性實驗 3．1、昆明小鼠AACQ一189半數(shù)致死量(LDso)為550mg／kg。 3．2、致死劑量的AACQ—l89對昆明小鼠的影響主要為免疫系統(tǒng)損傷。 結(jié)論：AACQ—189在抑制K562細胞增殖的有效濃度范圍內(nèi)對早期造血和胚胎細胞無顯著影響。我們推測AACQ一189對腫瘤細胞的殺傷具有較高的選