青蒿CQ-189對(duì)人紅白血病細(xì)胞株（K562）增殖抑制及誘導(dǎo)分化的影響.pdf

1、目的：白血病是嚴(yán)重威脅人類生命健康的造血系統(tǒng)惡性腫瘤。迄今白血病的治療仍主要采用傳統(tǒng)的大劑量聯(lián)合化療，但此療法副作用大，復(fù)發(fā)率高，尤其對(duì)機(jī)體的免疫功能和骨髓造血功能有極大損傷。因而尋找特異性高，對(duì)機(jī)體毒副作用小的新型天然抗腫瘤藥，是當(dāng)今抗腫瘤藥物研究的熱門課題。 青蒿屬菊科植物，青蒿素是從青蒿葉中分離的抗瘧疾有效成份。研究證實(shí)：青蒿素不僅具有良好的抗瘧疾作用而且又有抗腫瘤等多方面的藥理作用。文獻(xiàn)報(bào)道青蒿素衍生物對(duì)多種惡性腫瘤包括

2、血液惡性腫瘤有選擇性抑制作用。迄今為止，尚未見(jiàn)青蒿素衍生物對(duì)白血病增殖抑制及誘導(dǎo)分化的研究報(bào)道。K562細(xì)胞是一種分化很低的人類髓系白血病細(xì)胞，具有向紅系、粒一單核或巨核系細(xì)胞分化的可能性，是研究白血病細(xì)胞增殖分化的理想模型。本研究以課題組分離純化的AACO．189抗腫瘤成分為對(duì)象，采用現(xiàn)代生物學(xué)技術(shù)，探討了其對(duì)K562細(xì)胞增殖、分化的影響，并初步比較了它對(duì)正常細(xì)胞的作用和相關(guān)毒性作用，旨在闡述從CQ一189具有抑制白血病的作用，為研究

3、天然抗腫瘤藥物提供理論與實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：本實(shí)驗(yàn)采用臺(tái)盼蘭拒染法、四甲基偶唑鹽(MTT)法和流式細(xì)胞術(shù)(FCM)，研究AACQ一189體外作用對(duì)K562細(xì)胞增殖的影響及其與細(xì)胞周期調(diào)控的關(guān)系；通過(guò)光鏡、電鏡觀察與圖像分析法，研究經(jīng)AACQ一189誘導(dǎo)后K562細(xì)胞形態(tài)學(xué)(包括胞核成熟情況、核漿比例、細(xì)胞直徑、細(xì)胞體積、細(xì)胞器及特殊物質(zhì)形成)的改變；細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)過(guò)氧化物酶(POX)及非特異性脂酶(Q—NAE)表達(dá)的變化。

4、采用造血祖細(xì)胞體外半固體培養(yǎng)技術(shù)，觀察AACQ一189對(duì)小鼠多向造血祖細(xì)胞(CFU-Mix)增殖分化的作用。通過(guò)臺(tái)盼蘭拒染法、四甲基偶唑鹽(MTT)法研究AACQ一189體外作用對(duì)人臍血單個(gè)核細(xì)胞、人胚胎神經(jīng)干細(xì)胞和人胚肺成纖維細(xì)胞增殖的影響。通過(guò)昆明小鼠的體內(nèi)藥理實(shí)驗(yàn)，測(cè)定AACQ一189的半數(shù)致死量(LDso)，運(yùn)用石蠟切片，H．E染色技術(shù)觀察AACQ一189對(duì)小鼠重要器官的損傷。 結(jié)果： l、AACQ-189對(duì)人紅

5、白血病細(xì)胞株(K562)增殖抑制及誘導(dǎo)分化的影響。 1．1、AACQ一189對(duì)正常小鼠CFU-Mix和K562細(xì)胞增殖有雙向調(diào)節(jié)作用：AACQ—189在一定濃度范圍內(nèi)(3．125-25．00mg／L)對(duì)體外培養(yǎng)的正常小鼠CFU-Mix無(wú)明顯影響；MTT法顯示：AACQ一189(3．125-25．00mg／L)對(duì)K562細(xì)胞的增殖有抑制作用，并隨著藥物濃度增加和時(shí)間的延長(zhǎng)，其抑制作用逐漸增強(qiáng)。 1．2、AACQ一189可阻

6、止K562細(xì)胞進(jìn)入細(xì)胞增殖周期：流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)顯示，AACQ一189(12．5-25．0mg／L)作用K562細(xì)胞2天可明顯減少處于增殖活躍期的細(xì)胞數(shù)，提示AACQ—189可阻止細(xì)胞進(jìn)入增殖周期，從而抑制白血病細(xì)胞的增殖。 l3、AACQ．189可誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡：流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)顯示AACQ一189(12．5-25．0mg／L)作用K562細(xì)胞2天可出現(xiàn)10-20％的凋亡率。電鏡下可見(jiàn)到凋亡小體。 1．4、AACQ一

7、189誘導(dǎo)K562細(xì)胞分化：①形態(tài)學(xué)觀察表明：經(jīng)AACQ一189誘導(dǎo)后，K562細(xì)胞體積增大，細(xì)胞核固縮，胞漿中見(jiàn)大量空泡，胞漿量減少，核膜不完整。 ②細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)顯示：經(jīng)AACQ一189誘導(dǎo)后，K562細(xì)胞的血紅蛋白和過(guò)氧化物酶表達(dá)明顯增加。 2、AACQ-189對(duì)胚胎細(xì)胞增殖的影響。 AACQ一189在一定濃度范圍內(nèi)(3．125—12．5mg／L)對(duì)體外培養(yǎng)的人胚胎神經(jīng)干細(xì)胞和人胎肺成纖維細(xì)胞的增殖無(wú)顯著影響

8、。在25．0mg／L時(shí)對(duì)人胚胎神經(jīng)干細(xì)胞和人胎肺成纖維細(xì)胞有顯著的抑制作用。 3、AACQ-189對(duì)小鼠的毒性實(shí)驗(yàn) 3．1、昆明小鼠AACQ一189半數(shù)致死量(LDso)為550mg／kg。 3．2、致死劑量的AACQ—l89對(duì)昆明小鼠的影響主要為免疫系統(tǒng)損傷。 結(jié)論：AACQ—189在抑制K562細(xì)胞增殖的有效濃度范圍內(nèi)對(duì)早期造血和胚胎細(xì)胞無(wú)顯著影響。我們推測(cè)AACQ一189對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷具有較高的選