慢性髓性白血病細胞株k562對骨髓間充質(zhì)干細胞免疫特性影響的研究.pdf

1、目的:間充質(zhì)干細胞具有獨特的免疫調(diào)節(jié)能力，由于受損組織類型、組織所在微環(huán)境以及細胞來源的不同，間充質(zhì)干細胞的免疫調(diào)節(jié)效應(yīng)尚存在爭議，其發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)能力的多重機制仍需進一步探究。本課題在體外建立細胞間接共培養(yǎng)體系，探討慢性髓性白血病細胞株k562對SD大鼠來源的骨髓間充質(zhì)干細胞免疫特性的影響，為進一步探究腫瘤微環(huán)境下骨髓間充質(zhì)干細胞與血液腫瘤疾病發(fā)生、發(fā)展之間的聯(lián)系提供新的實驗基礎(chǔ)。
　　方法:采用全骨髓差速貼壁培養(yǎng)法分離培養(yǎng)SD大

2、鼠骨髓MSCs，通過光學顯微鏡觀察細胞形態(tài)特征；FCM檢測表面分子標記；誘導成骨、成脂分化進行細胞鑒定。通過Transwell小室建立K562和MSCs的間接共培養(yǎng)體系，RT-PCR法檢測K562作用下MSCs內(nèi)IL-6、IL-10 mRNA表達水平的變化；通過免疫熒光技術(shù)檢測MSCs內(nèi)iNOS的表達。分別用低濃度TLR3激動劑Poly（I:C）和TLR4激動劑LPS短時刺激正常MSCs，通過Transwell小室建立K562和MSCs

3、的間接共培養(yǎng)體系，以正常MSC作為對照組，通過RT-PCR法檢測MSCs內(nèi)IL-6、IL-1β、iNOS、IL-10 mRNA表達水平的變化。
　　結(jié)果:分離培養(yǎng)的細胞呈紡錘狀梭形，有典型的漩渦狀集落形成；成骨誘導21天后有結(jié)節(jié)樣結(jié)構(gòu)形成，結(jié)節(jié)均能被茜素紅染成紅色，提示有鈣鹽沉積，具有成骨分化能力；成脂誘導后MSC胞漿內(nèi)出現(xiàn)大小不等的脂滴，脂肪滴可被油紅O染成紅色，具有成脂分化能力；FCM表型鑒定提示所分離、培養(yǎng)的細胞表達CD29

4、、CD44、CD90、C-kit，不表達CD34、CD45表面標記，符合MSCs表型，可以用于后期實驗。與K562間接共培養(yǎng)后的MSCs內(nèi)IL-6、IL-10mRNA的表達均成上升趨勢，提示體外模擬的腫瘤微環(huán)境可以影響MSCs免疫相關(guān)細胞因子的表達。受到TLR3激動劑Poly（I:C）刺激的MSCs與K562間接共培養(yǎng)24h后，所表達的IL-10 mRNA相對受到TLR4激動劑LPS刺激的MSCs與K562間接共培養(yǎng)24h后所表達的IL

5、-10 mRNA有所減少，趨勢與共培養(yǎng)前相反；受到TLR4激動劑LPS刺激的MSCs與K562間接共培養(yǎng)24h后，所表達的IL-6、IL1-β、iNOS mRNA相對受到TLR3激動劑Poly（I:C）刺激的MSCs與K562間接共培養(yǎng)24h后所表達的IL-6、IL1-β、iNOS mRNA有所減少，趨勢與共培養(yǎng)前相反。
　　結(jié)論: SD大鼠BMMSCs具有免疫可塑性，慢性髓性白血病細胞株K562細胞可影響其免疫炎癥型別?？蛇M一步