重組人血管內(nèi)皮抑素對(duì)白血病K562及K562-A02細(xì)胞株增殖及凋亡的影響.pdf

1、研究背景：
　　慢性粒細(xì)胞白血病(Chronic Myelocytic Leukemia, CML)是一種獲得性造血干細(xì)胞惡性疾病,是最常見的骨髓增殖性疾病。主要特點(diǎn)是t(9;22) q(34;11)基因異位從而導(dǎo)致
　　BCR-ABL融合基因的產(chǎn)生,形成費(fèi)城染色體為主要特點(diǎn)。BCR-ABL融合基因編碼腫瘤蛋白P210 BCR-ABL并具有抗凋亡活性。與CML的發(fā)病原因有關(guān)。甲磺酸伊馬替尼(Imatinib mesylate

2、,IM,Gleevec,格列衛(wèi))依賴性與非依賴性耐藥機(jī)制可導(dǎo)致IM治療失敗。第二代第三代酪氨酸激酶抑制劑(Tyrosinekinase Inhibitor,TKI)雖已經(jīng)被FDA批準(zhǔn)用于治療CML,但價(jià)格昂貴,所以使用仍有局限性。越來(lái)越多的數(shù)據(jù)顯示,新生血管參與了白血病的發(fā)生及進(jìn)展?？拱籽』颊吖撬柩苄律蔀榘籽≈委煹那腥朦c(diǎn)之一。腫瘤進(jìn)展直接與細(xì)胞的增殖與死亡不平衡有關(guān)。細(xì)胞凋亡機(jī)制的缺陷可導(dǎo)致CML惡性表型的產(chǎn)生。目前已知的抗凋亡

3、蛋白家族中,BCL-2家族成員BCL-XL與BCL-2均為抗細(xì)胞凋亡蛋白,在癌癥與腫瘤中,BCL-2、BCL-XL均存在過表達(dá)現(xiàn)象。
　　目的：
　　1.研究重組人血管內(nèi)皮抑素(Recombinant Human Endostatin, rhES)對(duì)慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株K562及慢性粒細(xì)胞白血病多藥耐藥細(xì)胞株K562/A02增殖抑制作用。
　　2.研究K562、K562/A02細(xì)胞株經(jīng)rhES作用后,觀察相關(guān)凋亡蛋白

4、BCL-2、BCL-XL及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子VEGF表達(dá)的影響。
　　研究方法:
　　1.以K562細(xì)胞及K562/A02細(xì)胞株為實(shí)驗(yàn)細(xì)胞,放置于37℃,5％CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),直至其生長(zhǎng)穩(wěn)定。顯微鏡下觀察K562及K562/A02細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)狀態(tài);計(jì)數(shù)法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。
　　2.CCK-8檢測(cè)0、10、20、50、100、200和400μg/ml的rhES作用K562、K562/A02細(xì)胞6-72小時(shí)后的

5、細(xì)胞活性并計(jì)算IC50。
　　3.IC50濃度作為作用濃度作用于K562、K562/A02細(xì)胞株,使用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)經(jīng)rhES作用后K562、K562/A02凋亡率。
　　4.使用Elisa及實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)BCL-2、BCL-XL、VEGF的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.CCK-8結(jié)果顯示,rhES對(duì)K562、K562/A02細(xì)胞株有誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用。K562、K562/A02細(xì)胞株24小時(shí)后,細(xì)胞

6、生長(zhǎng)抑制50%的濃度(IC50)為100μg/ml,48小時(shí)后細(xì)胞生長(zhǎng)抑制50%的濃度(IC50)為200μg/ml。
　　2.rhES作用K562、K562/A02細(xì)胞后,經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè):100μg/ml與200μg/ml rhES作用于K562細(xì)胞24h,細(xì)胞凋亡率分別為13.60%和14.84%,作用于K562細(xì)胞48h后,細(xì)胞凋亡率分別為20.02%和23.64%。100μg/ml與200μg/ml rhES作用于K56

7、2/A02細(xì)胞24h,細(xì)胞凋亡率分別為10.97%和16.57%,作用于K562/A02細(xì)胞48h后,細(xì)胞凋亡率分別為13.33%和15.42%。
　　3.Elisa與RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示,100μg/ml、200μg/ml rhES分別作用K562、K562/A02細(xì)胞24h、48h后,BCL-2、BCL-XL、VEGF的表達(dá)均有下降,與未加藥物組相比差異具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論:
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