鼠病毒MHV68研究新探.pdf

1、鼠病毒MHV68(Murine Herpesvirus68)隸屬γ皰疹病毒。γ皰疹病毒與惡性腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，如EBV(Epstein-Barr virus)與鼻咽癌和Burkitt's淋巴瘤;KSHV(Kaposi's sarcoma-associatedherpesvirus)則是引起卡波氏肉瘤(Kaposi's sarcoma，KS)的直接病因，它的基因組幾乎可在所有卡波氏肉瘤中被檢出。EBV及KSHV極少能感染靈長(zhǎng)類以外的物種

2、;目前也沒有適合這兩種病毒感染和復(fù)制的細(xì)胞模型，因此尋找一個(gè)替代的研究模型顯得十分必要。MHV68恰好符合這個(gè)研究模型的要求:MHV68的基因組中約78％的開放閱讀框與KSHV和EBV同源，且能感染實(shí)驗(yàn)小鼠，在體外能感染多種細(xì)胞，包括各種哺乳動(dòng)物的上皮細(xì)胞系和成纖維細(xì)胞系。
　　近年來，斑馬魚作為一種重要的模式生物得到了廣泛的應(yīng)用，特別是在胚胎發(fā)育機(jī)制及各種人類疾病的研究中。相比于小鼠，斑馬魚在科學(xué)研究中又有許多獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，比如成

3、本低、對(duì)人體和環(huán)境無(wú)害、容易獲得、易于在實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)和繁殖、子代多等。然而，目前尚未有采用斑馬魚研究MHV68的報(bào)道。
　　本研究采用斑馬魚受精卵、ZF4細(xì)胞、IKKα敲除的MEF(MouseEmbryonic Fibroblast)細(xì)胞(MEF/IKKα-/-)，乳倉(cāng)鼠腎細(xì)胞(BHKcells，Baby Hamster Syrian Kidney)作為感染對(duì)象，得到一系列實(shí)驗(yàn)結(jié)果，具體研究?jī)?nèi)容和研究結(jié)果如下:
　　1、斑馬魚

4、受精卵被MHV68感染后，出現(xiàn)了胚胎發(fā)育延遲的現(xiàn)象。感染過的斑馬魚受精卵發(fā)育成熟后，提取基因組DNA，在其中檢測(cè)到了MHV68的基因片段。在胚胎發(fā)育各階段，用Q-PCR檢測(cè)了發(fā)育相關(guān)基因和免疫相關(guān)基因的表達(dá)變化，發(fā)現(xiàn)僅有轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(Transforming growth factorβ1，TGFβ1)在實(shí)驗(yàn)組（感染了MHV68的斑馬魚受精卵）中的表達(dá)比對(duì)照組低，而其它發(fā)育及免疫相關(guān)基因:FGF3、IFNθ1、IFNθ3、ISG15

5、、TNFα，以及細(xì)胞質(zhì)病毒DNA感受因子:DDX41、DHX9、cGAS和MAVS在實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組中沒有明顯區(qū)別。
　　2、IKKα敲除的MEF細(xì)胞被MHV68感染后，通過比較，其病毒噬斑大小都要小于其他細(xì)胞，包括MEF/IKKα-/-/IKKα等，可以得出結(jié)論:IKKα有助于MHV68感染MEF細(xì)胞。
　　3、BHK細(xì)胞用青魚Ⅰ型干擾素a(bcIFNa)處理后，用MHV68感染發(fā)現(xiàn):300微升bcIFNa預(yù)處理的BHK細(xì)胞