鼠IFN-λ2重組腺病毒載體體內(nèi)抗肺癌活性研究.pdf

1、目的:觀察本實驗組構(gòu)建的鼠IFN-λ2(mIFN-λ2)重組腺病毒載體(Ad-mIFN-λ2)感染小鼠后能否成功表達,并通過重組腺病毒載體Ad-mIFN-λ2感染至LA795肺腺癌細胞荷瘤鼠內(nèi),研究mIFN-λ2對LA795荷瘤鼠腫瘤細胞增殖的影響及其誘導凋亡、激活機體免疫反應的機制。
　　 方法:采用已構(gòu)建成功的重組腺病毒載體Ad-mIFN-λ2感染至小鼠體內(nèi),采用Westernblot檢測mIFN-λ2基因在小鼠組織內(nèi)的表達

2、情況,通過小鼠的體重增長情況觀察其對小鼠生長的影響;進一步實驗將Ad-mIFN-λ2感染至小鼠肺腺癌細胞LA795的荷瘤鼠內(nèi),通過繪制腫瘤生長曲線觀察腫瘤細胞的生長速度,21天后處死小鼠,取小鼠瘤體、脾臟、骨胳肌等組織,HE染色顯微鏡下觀察小鼠瘤體組織、脾臟組織內(nèi)的病理改變,采用RT-PCR檢測小鼠骨骼肌組織及腫瘤組織內(nèi)mIFN-λ2的基因表達,Westernblot檢測小鼠腫瘤組織mIFN-λ2的蛋白表達,Tunel凋亡檢測試劑盒檢測

3、小鼠腫瘤組織的細胞凋亡,流式細胞檢測術(shù)檢測小鼠脾臟免疫細胞NK細胞、CD4+細胞、CD8+細胞的改變。
　　 結(jié)果:小鼠感染Ad-mIFN-λ2后在蛋白水平上mIFN-λ2表達量明顯高于對照組,且小鼠生長基本正常:進一步的腫瘤體內(nèi)實驗研究,腫瘤生長曲線示:PBS組感染后14d、21d與Lacz組無明顯統(tǒng)計學差異,前兩者與Ad-mIFN-λ2組相比有明顯差異(p＜0.01),且Ad-mIFN-λ2組小鼠瘤體組織中央呈囊樣改變,脾臟

4、增大,病理檢查顯示此組腫瘤壞死增多,脾臟中多核巨細胞增多,白髓增寬;RT-PCR結(jié)果:Ad-mIFN-λ2感染組骨骼肌組織及腫瘤組織出現(xiàn)明顯約220bp的mIFN-λ2基因的條帶;Westernblot示Ad-mIFN-λ2組出現(xiàn)明顯27kDa的mIFN-λ2蛋白的條帶;Tunel凋亡檢測提示Ad-mIFN-λ2組凋亡明顯高于PBS組與Lacz組(p＜0.001),流式細胞檢測示:Ad-mIFN-λ2組NK、CD8+、CD4+細胞數(shù)明顯