自噬通過(guò)抑制Ⅰ型干擾素產(chǎn)生負(fù)向調(diào)控抗病毒固有免疫反應(yīng).pdf

1、固有免疫(innate immunity)是機(jī)體抵抗病毒的第一道防線。當(dāng)病毒入侵機(jī)體后，即被模式識(shí)別受體(pattern-recognition receptors，PRRs)識(shí)別，快速誘導(dǎo)固有免疫應(yīng)答，產(chǎn)生大量的Ⅰ型干擾素(interferon，IFN)和促炎因子。Ⅰ型干擾素可以與胞膜上相應(yīng)的受體結(jié)合，誘導(dǎo)一系列抗病毒蛋白高表達(dá)，進(jìn)而抑制病毒的復(fù)制和感染，發(fā)揮強(qiáng)有力的抗病毒效應(yīng)。因此，Ⅰ型干擾素的表達(dá)調(diào)控一直是抗病毒免疫研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)

2、。
　　自噬是一種發(fā)生在真核細(xì)胞內(nèi)并且高度保守的自我穩(wěn)態(tài)機(jī)制，對(duì)細(xì)胞抵抗外部刺激有非常重要的意義。病毒感染可以引起自噬的產(chǎn)生，但是目前關(guān)于自噬在病毒感染過(guò)程中所起的作用的研究很少，機(jī)制尚不明確。所以我們對(duì)自噬在抗病毒固有免疫應(yīng)答中的作用機(jī)制進(jìn)行了探究。我們構(gòu)建了自噬相關(guān)基因7(Autophagyrelated gene7，ATG7)在髓系細(xì)胞中特異性敲除的小鼠(Atg7f/f Lysm-Cre)。用VSV-GFP病毒感染小鼠的腹腔

3、巨噬細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)自噬缺陷之后小鼠的腹腔巨噬細(xì)胞對(duì)病毒的清除率增強(qiáng)，具有更強(qiáng)的抗感染能力。隨后，我們給小鼠腹腔注射VSV病毒觀察小鼠的存活率，得到了和體外實(shí)驗(yàn)一致的結(jié)果，自噬缺陷組小鼠的存活率明顯升高，肺部組織炎性浸潤(rùn)增強(qiáng)，巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞富集明顯增多，病毒復(fù)制減少，小鼠抗病毒能力明顯增強(qiáng)。因?yàn)棰裥透蓴_素在抗病毒固有免疫中發(fā)揮著重要作用，所以我們接著探究了自噬缺陷引起的這種抗病毒效應(yīng)是否是因?yàn)橛绊懥刷裥透蓴_素的產(chǎn)生。所以我們用病毒感染小

4、鼠的腹腔巨噬細(xì)胞，檢測(cè)了對(duì)照組和自噬敲除組小鼠腹腔巨噬細(xì)胞Ⅰ型干擾素mRNA的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)病毒感染之后自噬缺陷組的Ⅰ型干擾素mRNA表達(dá)明顯增強(qiáng)。證實(shí)了自噬缺陷確實(shí)影響了Ⅰ型干擾素的合成，從而增強(qiáng)了抗病毒效應(yīng)。VSV病毒是一種dsRNA病毒，主要通過(guò)活化TLR3信號(hào)通路和RIG-Ⅰ信號(hào)通路來(lái)引起Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生，隨后我們對(duì)RNA病毒活化的信號(hào)通路進(jìn)行了篩選和驗(yàn)證。我們用免疫印跡實(shí)驗(yàn)對(duì)不同信號(hào)通路主要的抗病毒蛋白的降解情況進(jìn)行了檢測(cè)，發(fā)