利用大鼠原代心肌細(xì)胞研究HZFHG5α.pdf

1、心肌肥大的發(fā)病機(jī)制一直以來是心血管疾病研究領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一，近年來對于心肌肥大的發(fā)生已取得很大的進(jìn)展，但是其分子機(jī)制仍遠(yuǎn)未闡明。因此，研究清楚心肌肥大發(fā)生的相關(guān)分子機(jī)制對闡明心臟病的發(fā)病機(jī)理、基因診斷并最終利用分子干預(yù)手段治療心臟病，都具有非常重要的意義。
　　心肌肥大是心肌細(xì)胞對高血壓、瓣膜病、急性心肌梗死及先天性心臟病等常見臨床疾病的一種基本應(yīng)答。本實(shí)驗(yàn)室前期工作已經(jīng)從心臟cDNA文庫中克隆得到人類新基因HZFHG5a。通過

2、組織表達(dá)分析發(fā)現(xiàn)HZFHG5a主要在小鼠的腸、腎、肝、心臟中表達(dá)。免疫共沉淀結(jié)果證明了HZFHG5a能與TGF-β信號通路中的SMAD6/7發(fā)生相互作用。同時利用HZFHG5a基因過表達(dá)的穩(wěn)定細(xì)胞系發(fā)現(xiàn)HZFHG5a能夠部分抑制TGF-β信號通路中由TGF-β刺激所引起的SMAD2/3蛋白的磷酸化程度，進(jìn)而抑制SMAD4蛋白的穿核過程。由此可見HZFHG5a很可能通過TGF-β信號通路參與調(diào)控心肌肥大的發(fā)生。
　　為了進(jìn)一步研究H

3、ZFHG5a調(diào)控肥大的分子機(jī)制，我們首先在HEK293A細(xì)胞系中擴(kuò)增了HZFHG5a腺病毒質(zhì)粒。其次分離新生大鼠心肌細(xì)胞，使用腺病毒轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞，并利用RT-PCR和WesternBlot技術(shù)檢測了HZFHG5a的表達(dá)，以及經(jīng)PE或10％FBS誘導(dǎo)后肥大標(biāo)志基因ANF、β-MHC、SKA的表達(dá)。最后，我們在H9C2細(xì)胞系中轉(zhuǎn)染HZFHG5a質(zhì)粒過表達(dá)HZFHG5a以及熒光報(bào)告質(zhì)粒，檢測心臟發(fā)育相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果表明，過表達(dá)HZFH