T7肽修飾PEG--PAMAM丹參酮ⅡA腦靶向納米遞藥系統(tǒng)的研究.pdf

1、缺血性腦卒中具有高發(fā)病率、高致殘率、高死亡率等特點，嚴重危害人類的生命健康安全。而且由于血腦屏障(blood brain barrier，BBB)的存在，使得許多神經保護性化合物向大腦遞送困難，對治療缺血性腦卒中的效果始終不理想。因此，使神經保護藥物有效通過BBB是治療缺血性腦卒中需要迫切解決的難題。
　　實驗研究已經證明，采用特異性靶向配體修飾的納米顆粒具有高效穿過BBB的能力。聚酰胺-胺(Polyamide amine，PAM

2、AM)樹狀大分子作為一種新型多功能納米載體，越來越多被用于生物活性物質遞送和控制藥物釋放，這主要由于其可通過共價鍵或物理吸收的方式可將藥物負載在疏水性的空腔內，具有顯著的表面分子附著力。
　　所以本研究以PAMAM樹狀大分子為基質藥物載體，采用雙官能團聚乙二醇(NHS-PEG-MAL)修飾PAMAM，通過靶向配體T7肽修飾PEG-PAMAM納米粒(nanoparticles，NPs)，最后采用物理包埋的方式包載丹參酮ⅡA(Tans

3、hmoneⅡA，TSⅡA)制備T7-PEG-PAMAM/TSⅡA NPs納米遞藥系統(tǒng)，并進行了體內靶向性和藥效學方面的研究，具體研究內容及結果如下:
　　1、以乙二胺和丙烯酸甲酯為反應物，通過邁克爾加成和酰胺化反應交替進行制備第5.0代(generation，5.0G)PAMAM樹狀大分子，再與NHS-PEG-MAL反應成功制備PEG-PAMAM聚合物。
　　2、通過T7肽末端的巰基與NHS-PEG-MAL分子鏈末端的馬來酰

4、亞胺(MAL)基團偶聯(lián)制備T7-PEG-PAMAM NPs，在掃描電鏡下觀察T7-PEG-PAMAM NPs的形態(tài)呈橢圓狀而且無粘連，測定T7-PEG-PAMAM NPs的平均粒徑138±0.229nm，zeta電位2.44±0.62mV。
　　3、采用物理包埋法制備T7-PEG-PAMAM/TSⅡA NPs納米遞藥系統(tǒng)，通過高效液相色譜法測定其包封率為75.14％，載藥量為23.17％，通過透析法考察了T7-PEG-PAMAM/

5、TSⅡA NPs的體外釋藥行為，實驗結果表明，與TSⅡA原藥相比，T7-PEG-PAMAM NPs具有明顯的藥物緩釋作用。
　　4、對小鼠尾靜脈注射熒光探針DiR標記的PAMAM NPs、PEG-PAMAM NPs和T7-PEG-PAMAM NPs，進行體內熒光分布研究。結果表明，DiR標記的T7-PEG-PAMAM NPs在腦組織中的熒光強度明顯高于PEG-PAMAM組和PAMAM組，降低了在其它器官的分布，并且DiR-T7-P

6、EG-PAMAM NPs在注射1.5h后，在小鼠腦部的熒光富集達到高峰，說明T7-PEG-PAMAM NPs具有較好的腦靶向性。
　　5、通過大腦中動脈閉塞(MCAO)模擬SD大鼠的缺血性腦卒中。以游離的TSⅡA混懸液和以腦缺血再灌注大鼠為對照組，進行T7-PEG-PAMAM/TSⅡA的藥效學研究。測量腦缺血再灌注損傷后的梗死體積，進行神經功能缺損評分，以及測量腦組織勻漿中超氧化物歧化酶(SOD)、Na+-K+-ATP酶、谷胱甘肽