短鏈脂肪酸在體外及體內(nèi)調(diào)節(jié)堿性磷酸酶對脂多糖降解的研究.pdf

1、目的:研究短鏈脂肪酸在體外對肝癌細胞、結(jié)腸癌細胞堿性磷酸酶的轉(zhuǎn)錄水平及表達的影響。通過短鏈脂肪酸對C57BL/6肥胖小鼠灌腸，觀察小鼠血清中堿性磷酸酶和內(nèi)毒素的水平，以及肝臟和腸道ALP轉(zhuǎn)錄及表達水平。探索短鏈脂肪酸是否通過調(diào)節(jié)ALP的表達降低內(nèi)毒素血癥。
　　方法:
　　1)體外部分:采用MTT方法確定SCFA作用于HepG2細胞和CaCO2細胞的最適濃度及最適時間;SCFA與HepG2細胞及CaCO2細胞共培養(yǎng)后，通過r

2、eal-time PCR及酶速法檢測兩種細胞ALP的轉(zhuǎn)錄水平及活性;2）體內(nèi)部分:以高脂飼料喂養(yǎng)C57BL/6小鼠9周，完成肥胖小鼠造模。造模后SCFA灌腸，通過酶速法檢測ALP的量，通過鱟實驗檢測LPS的量，real-time PCR的方法檢測肝臟和腸道ALP、TNF-a的轉(zhuǎn)錄水平。
　　結(jié)果:
　　體外部分:
　　1)乙醇10-3M，乙酸10-2M，丁酸10-4M，培養(yǎng)時間為48小時，HepG2細胞存活率最高，差異

3、有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);2）乙醇、乙酸及丁酸可以增加HepG2細胞的ALP及CaCO2細胞的IAP轉(zhuǎn)錄水平，且具有統(tǒng)計學差異(P＜0.05);3)HepG2細胞在丁酸、乙酸的刺激下，ALP活性增高，有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。CaCO2細胞在丁酸的刺激下，ALP活性增高，有統(tǒng)計學差異（P＜0.05）。
　　體內(nèi)部分:1）C57BL/6小鼠高脂飼料喂養(yǎng)9周，體重、Lee's指數(shù)、脂肪指數(shù)及糖耐量均較正常組增加，具有統(tǒng)計學差異

4、（P＜0.05）;2）C57BL/6小鼠正常組血清ALP較高脂組升高，而LPS較高脂組LPS降低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。SCFA干預后，乙酸組、丁酸組ALP較NS組升高，LPS較NS組降低，且有統(tǒng)計學差異（P＜0.05），血清LPS的量與ALP成負相關;3）SCFA灌腸:乙酸、丁酸肝臟ALP的轉(zhuǎn)錄水平較對照組明顯升高，有統(tǒng)計學差異(P＜0.05）。高脂組較正常組腸道IAP的表達量增加，具有統(tǒng)計差異(P＜0.05)，丁酸組IA

5、P的轉(zhuǎn)錄水平增加(P＜0.05)，有統(tǒng)計學意義。乙酸灌腸可以降低腸道IAP的轉(zhuǎn)錄水平，但無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1)乙酸、乙醇及丁酸可上調(diào)HepG2細胞ALP的轉(zhuǎn)錄水平，而乙酸及丁酸使HepG2細胞ALP活性增加;
　　2)乙酸、乙醇及丁酸可以上調(diào)CaCO2細胞IAP的RNA轉(zhuǎn)錄水平，僅丁酸可增加CaCO2細胞的IAP活性。
　　3) SCFA干預C57BL/6肥胖小鼠，可改善糖耐量異常，