S1P、LPA引起保存期間血小板功能改變的初頻研究.pdf

1、作為血液的主要成分之一，血小板的主要生理功能是參與凝血反應(yīng)。多種病理條件，如遺傳因素、腫瘤放化療后、藥物反應(yīng)、失血等，均可能導(dǎo)致血小板數(shù)量減少或功能降低。此時輸注血小板是緩解癥狀和挽救患者生命的一項重要措施。但臨床血小板輸注常常引發(fā)多種輸血反應(yīng)，造成血小板輸注無效，這是臨床血小板輸注面臨的一個主要難題，也是目前輸血領(lǐng)域所關(guān)注的焦點問題之一。針對血小板輸注無效已經(jīng)開展了廣泛的基礎(chǔ)和臨床試驗研究。目前認(rèn)為，引起血小板輸注無效的原因復(fù)雜，主要

2、歸為免疫因素和非免疫因素兩大類。免疫因素引起的血小板輸注無效是由于受血者血漿中存在抗供血者血小板的抗體，引起抗原抗體反應(yīng)，進而殺傷供血者血小板。非免疫因素包括感染、發(fā)熱、敗血癥、DIC等。此外，血小板在采集、離心、儲存等多個環(huán)節(jié)均可由于條件不當(dāng)而被“激活”，造成“儲存損傷”影響血小板質(zhì)量，導(dǎo)致血小板輸注無效。血小板在保存過程中被激活產(chǎn)生了何種物質(zhì)，又是通過什么途徑引起的輸注無效已成為研究的重點。由于對其作用機制一直缺乏深入了解，所以由儲

3、存損傷引起的血小板輸注無效目前仍然沒有好的解決方法。
　　 有研究揭示，在保存過程中，活化的血小板代謝產(chǎn)生的磷脂類代謝產(chǎn)物1-磷酸鞘氨醇(S1P)和溶血磷脂酸(LPA)對血小板的功能施加了某種影響。LPA和SIP作用于同一類細(xì)胞膜受體，即由內(nèi)皮分化基因編碼的G蛋白偶聯(lián)受體家族（endothelial differentiation genes，Edgs），引發(fā)一系列細(xì)胞生物學(xué)反應(yīng)。目前共發(fā)現(xiàn)8個Edgs受體家族成員，是SIP、L

4、PA的特異性受體。根據(jù)此理論基礎(chǔ)，本研究將對血小板在保存過程中代謝產(chǎn)生的SIP、LPA進行檢測，觀察其產(chǎn)生規(guī)律和對血小板功能的影響。進而利用受體拮抗劑阻斷其影響，觀察血小板功能的變化。
　　 本研究的第一部份利用酶聯(lián)免疫法檢測血小板代謝所產(chǎn)生的兩種磷脂類代謝產(chǎn)物SIP、LPA，并觀察其代謝規(guī)律。結(jié)果顯示：隨著保存時間的延長，S1P、LPA的含量持續(xù)增加。對保存5天的血小板懸液連續(xù)監(jiān)測，S1P的含量分別為：1.38±0.17、2.

5、07±0.25、2.78±0.31、3.53±0.28、4.56±0.46(umol/L),LPA的含量分別為：1.74±0.36、2.34±0.60、3.01±0.47、4.11±0.46、4.81±0.43(umol/l)。在第二部分中，分別加入不同濃度的外源性S1P、LPA，觀察血小板功能的改變。對保存5天的血小板生理指標(biāo)進行動態(tài)監(jiān)測，結(jié)果顯示：不同處理組間，血小板計數(shù)、pH值、血小板代謝產(chǎn)物乳酸含量均無統(tǒng)計學(xué)差異；而血小板體外聚

6、集率隨加入的S1P、LPA濃度的增加而降低，血小板的活化率也隨之升高，凋亡程度增加，電鏡下血小板超微結(jié)構(gòu)有明顯改變。實驗的結(jié)果均有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)。在第三部分中，利用受體拮抗劑百日咳毒素(PTX)阻斷S1P、LPA與血小板表面受體的結(jié)合，觀察血小板的功能改變。結(jié)果顯示：血小板理化性質(zhì)包括血小板計數(shù)、pH值、乳酸均無統(tǒng)計學(xué)差異，而血小板體外聚集及活化程度、凋亡等功能有所恢復(fù)。實驗結(jié)果均有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)，電鏡下觀察血小

7、板超微結(jié)構(gòu)有明顯變化。
　　 上述實驗結(jié)果表明：血小板在保存期間， S1P、LPA的含量隨著時間的延長而增加；不同濃度的外源性S1P、LPA可導(dǎo)致血小板的聚集功能下降、活化、凋亡程度的增加，說明S1P、LPA是引起體外保存的血小板功能下降的重要因素之一。有文獻(xiàn)報道S1P、LPA通過血小板表面G蛋白耦聯(lián)受體的介導(dǎo)，影響血小板的生理功能，而PTX能阻斷其與受體的結(jié)合。本研究通過加入受體拮抗劑PTX阻斷S1P、LPA與受體的結(jié)合，從而