天蠶素A-馬蓋寧雜合肽作用于耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)DNA機(jī)制的研究.pdf

1、目的：研究天蠶素A-馬蓋寧雜合肽作用于耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)DNA的機(jī)制，并探討天蠶素A-馬蓋寧雜合肽作用MRSA后對細(xì)胞生理代謝的影響機(jī)制，為臨床更合理地應(yīng)用天蠶素A-馬蓋寧雜合肽提供科學(xué)的理論依據(jù)。
　　方法：1.采用微量肉湯稀釋法測定天蠶素A-馬蓋寧雜合肽對MRSA的最小抑菌濃度（MIC）；
　　2.利用激光共聚焦激光掃描顯微鏡（CLSM）觀察天蠶素A-馬蓋寧雜合肽在MRSA細(xì)胞內(nèi)的累積；
　　3.

2、利用凝膠阻滯分析觀察天蠶素A-馬蓋寧雜合肽與MRSA基因組DNA的結(jié)合能力；
　　4.利用紫外光譜分析天蠶素A-馬蓋寧雜合肽與MRSA基因組DNA作用的光譜變化；
　　5.利用熒光光譜分析天蠶素A-馬蓋寧雜合肽與MRSA基因組DNA的作用、分析雜合肽與EB-DNA復(fù)合體系滴定的光譜變化、分析EB與雜合肽-DNA復(fù)合體系滴定的光譜變化，計(jì)算雜合肽與MRSA基因組DNA作用的結(jié)合常數(shù)和成鍵位點(diǎn)數(shù)；
　　6.利用全波長酶標(biāo)儀

3、測定天蠶素A-馬蓋寧雜合肽作用MRSA后對細(xì)胞DNA、RNA以及總蛋白合成能力的影響；
　　7.分析天蠶素A-馬蓋寧雜合肽作用MRSA后對細(xì)胞β-半乳糖苷酶、堿性磷酸酶表達(dá)活性的影響；
　　8.采用O2微溶氧電極（OX50）測量天蠶素A-馬蓋寧作用MRSA后對細(xì)胞呼吸作用的影響；
　　9.利用生物發(fā)光分析儀檢測天蠶素A-馬蓋寧作用MRSA后對細(xì)胞ATP生產(chǎn)的影響。
　　結(jié)果：1.天蠶素A-馬蓋寧雜合肽對MRSA的

4、MIC值為64mg/L；
　　2.天蠶素A-馬蓋寧雜合肽處理MRSA不同時(shí)間后，激光共聚焦激光掃描顯微鏡觀察濃度為MIC的FITC-肽與MRSA作用10min后，有比例為32.2％的細(xì)菌出現(xiàn)了熒光，而雜合肽作用MRSA30min后，雜合肽進(jìn)入細(xì)菌胞內(nèi)的比例升高達(dá)到71.4%，熒光強(qiáng)度也更強(qiáng)；
　　3.通過凝膠阻滯分析觀察到雜合肽與MRSA基因組DNA有很強(qiáng)的結(jié)合能力；
　　4.天蠶素A-馬蓋寧雜合肽作用MRSA基因組D

5、NA引起紫外光譜發(fā)生減色效應(yīng)，可能改變了DNA的分子構(gòu)象；
　　5.熒光光譜分析溶液體系中雜合肽與EB存在競爭性結(jié)合DNA的方式；通過計(jì)算得出天蠶素A-馬蓋寧雜合肽與MRSA基因組DNA之間相互作用Scatchard方程的結(jié)合常數(shù)KM=1.87×107，成鍵位點(diǎn)數(shù)n=0.13。
　　6.與空白對照組相比,兩不同濃度天蠶素A-馬蓋寧雜合肽作用MRSA后對細(xì)胞DNA、RNA、總蛋白的合成能力均出現(xiàn)明顯的抑制作用（P<0.05）；

6、
　　7.雜合肽抑制了胞內(nèi)兩個(gè)重要酶β-半乳糖苷酶和堿性磷酸酶的的表達(dá)活性，同時(shí)這與雜合肽抑制蛋白合成能力的結(jié)果是一致的；
　　8.與對照組相比，雜合肽1×MIC濃度組處理的菌懸液中溶氧率，前50min內(nèi)未出現(xiàn)明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，60min時(shí)則出現(xiàn)明顯差異。雜合肽在更高的濃度范圍對細(xì)胞呼吸作用的抑制作用更為強(qiáng)烈。
　　9.與空白對照組相比，不同濃度的天蠶素A-馬蓋寧雜合肽組作用MRSA后對ATP的生產(chǎn)均出現(xiàn)不同程度的抑制